受体研究技术应用.pptVIP

受体研究技术 Techniques in receptor research ;相关帮助;第八章 组织化学技术在受体定位中的应用;免疫组织化学优缺点 ;包括﹕ 1.抗原(受体)提取和纯化 抗原可为完整蛋白或一段特异性片段。 2.免疫动物或细胞融合(单克隆抗体)。 3.抗体效价检测和提取。 4.抗体标记。 5.细胞和组织标本的制备。 6. 免疫组织化学反应和显色。 7.观察和记录结果。 ;免疫组织化学标本的制备;保持细胞和组织的原有结构, 防止组织自溶.不仅使细胞和组织内蛋白质凝固，终止和抑制外源性和内源性酶活性，更重要的是最大限度地保存 细胞和组织的抗原性及防止抗原的扩散。 ;固定组织时应注意: *力求保持组织新鲜, 勿使其干燥, 尽快固定处理. *组织块不易过大过厚, 必须小于 2cm x 1.5cm x 0.3cm, 尤其是组织块厚度须保持在0.3cm 以内. *固定剂必须有足够的量, 在体积上一般大于组织20倍。 *组织固定后, 应充分水洗, 去除固定剂, 以减少固定剂造成的人为假像.; 载玻片处理 ;免疫组织化学方法 ;免疫荧光组织化学;A.用免疫荧光组织化学间接法显示角质细胞生长因子受体(Keratinocytew Growth Factor receptor, KGFR)定位于细胞的细胞膜。B.在KGFR抗体孵育液中加入过量KGFR，染色结果