淀粉糊化实验报告.docVIP

淀粉糊化度的测定 实验目的 掌握酶解法测定淀粉糊化度原理和方法 二. 实验原理 酶解法，淀粉经糊化后才能被淀粉酶作用，未糊化的淀粉（生淀粉）不能被淀粉酶作用。加工样品中的淀粉通常为部分糊化，需要测定其糊化度。将样品、完全糊化样品分别用淀粉酶（本实验用糖化酶）水解，测定释放出的葡萄糖含量，以样品的葡萄糖释放量与同一来源的完全糊化样品的葡萄糖释放量之比来表示淀粉糊化（熟化）度。 二．实验仪器和试剂 仪器：天平（灵敏度0.001）、恒温水浴、分光光度计 试剂：缓冲液（将3.7ml冰醋酸和4.1g无水乙酸钠溶于100ml蒸馏水，定容至1000ml，必要时可滴加乙酸或乙酸钠调节PH值至4.5左右）、 酶溶液（将1g葡萄糖淀粉酶（糖化酶）溶于100mL缓冲液，过滤。（现配，共用））、蛋白质沉淀剂、蒸馏水溶液、、 铜试剂、磷钼酸试剂 三．实验步骤 1、准确称取两份样品（加工后的碎米粉）100mg于25ml刻度试管，其中一份供制备完全糊化样品，另一份为测定样品。 （1）完全糊化样品：向样品中加入15ml缓冲液，记录液面高度，混匀后将试管置于沸水浴中加热50min（期间摇动2 ~3次），用自来水冷却试管，滴加适量蒸馏水使液面恢复到加热前位置，即为完全糊化样品。 （2）测定样品：向待测样品中加入15ml缓冲液。 （3）空白：取一支空的25ml刻度试管，加入15ml缓冲液。 2、分别向上述3支刻度试管中加入1ml酶溶液，在40℃水浴中保温50min，起初摇动一次，以后每隔15mln摇动一次。 3、保温50min之后，分别加入2ml 10%的,混匀，再加1ml，用水稀释至25ml，混匀，过滤。 4、准确吸取0.1ml滤液和2ml铜试剂，分别加入3支25ml刻度试管中（清洗干净再标号），将试管置于沸水浴中6min（开盖），保持沸腾，沸水浴加2ml磷钼酸试剂，继续加热2min。 5、用自来水将试管冷却，加蒸馏水定容至25ml，堵住试管口（可用手套的拇指或手掌），反复颠倒试管使之混匀。 6、用分光光度计在420nm处读出吸光值 7、测定样品糊化（熟化）度的公式计算 四、实验结果 每份加工的米粉分别称量100mg，分别进行糊化，酶解，最后测定的吸光值如下 样品 吸光值 完全糊化样品 待测样品 空白 0.175 0.109 0.032 测定样品的糊化度为： ×100%= EQ \F(0.109-0.032,0.175-0.032)=53.85% 五．结果分析： 1、完全糊化时，经常要打开水浴锅的锅盖，仪器的设定问题，温度不够100℃，糊化程度不够。 2、配制酶溶液中，可能有一部分酶已经在贮存的过程中变形或者失效，导致糊化度偏低。 3、样液定容过程中，由于温度过高，导致定容不准确，结果有偏差。