神奇的基因编辑技术.pptVIP

* * * * * * * * * 有1 个DNA 识别域特异性地识别靶位点，有1 个核酸内切酶非特异性剪切DNA 双链，两者配合着行使功能。 FokⅠ是来自海床黄杆菌的一种限制性内切酶，只有形成二聚体时才能发挥酶切活性。 在2 个靶位点之间剪切DNA，在DSB 处诱发DNA 的NHEJ 或HＲ 损伤修复机制。 ( 1) 开发时间: 相对于2007 年才起步的TALEN 技术，ZFN 技术的研发和商业化已相当成熟。 ( 2) 目标序列的识别: 锌指结构域识别的是三联碱基，而TALEN 结构域识别的是单一的核苷酸。如果一个蛋白质包括3 个锌指结构的话，它可以识别9 个碱基对的片段，而TALEN 则需要9 个重复单元的可变双氨基酸残基位点( repeat-variable di-residues，ＲVD) 。但TALE 的核酸识别单元与任一碱基( A、G、 C、T) 有恒定的对应关系，构建时不受基因序列、细胞、物种等的限制，并且设计简单、实验周期短、成本低，具有与ZFN 相等或更好的活性。 ( 3) 上下文依赖效应［25］: ZFN 在识别DNA 位点时，存在着上下文依赖效应。即识别DNA 的重复氨基酸之间会产生相互作用，使得识别特异性发生改变，从而影响基因打靶的效果。但目前尚未见TALEN 具有上下文依赖效应的报道。 ( 4) 脱靶效应: 锌指酶切割时会产生脱靶效应，从而产生毒副作