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2019届高三生物小专题强化训练（12） 现代生物科技专题 1．研究人员为探究紫檀芪对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机理，进行了如下实验，以期为临床应用提供依据。 实验一：紫檀芪对胃癌细胞的增殖影响研究 取等量旺盛增殖的胃癌细胞，分别接种到含不同浓度紫檀芪的培养液中，分别培养24 h、48 h、72 h后收集细胞。运用台盼蓝拒染法统计活细胞数量，并计算癌细胞增殖抑制率，结果如图1(癌细胞增殖抑制率＝eq \f(对照组活细胞数－实验组活细胞数,对照组活细胞数)×100%)。 实验二：紫檀芪对胃癌细胞凋亡蛋白表达的影响研究　用含不同浓度紫檀芪的培养液培养旺盛增殖的胃癌细胞。48 h后电泳比较几种细胞凋亡指示蛋白的含量(Caspase-9是一种凋亡启动因子；Bax能引起线粒体穿孔导致线粒体内物质外流；Bcl-2蛋白是细胞存活促进因子，能抑制细胞凋亡)，结果如图2。 请回答下列问题： (1)培养胃癌细胞时，培养液中加入胎牛血清的作用是______________，培养箱中充入5% CO2的作用是___________。在进行传代培养时不能使用胃蛋白酶的原因是___________。 (2)实验一中用台盼蓝拒染法检测细胞存活率时，活细胞未被染成蓝色是因为______________。 根据图1结果，研究人员建议临床上选择浓度为40 μmol/L的紫檀芪进行化疗，其依据是____________，为了达到______更理想的治疗效果还需要注意____________。 (3)根据实验二结果分析，紫檀芪能诱导胃癌细胞凋亡的机理有_________________________________(至少答两点)。 答案　(1)补充细胞生长所需的未知营养物质　维持培养液的pH基本稳定　动物细胞培养液pH在7.2～7.4之间，在此pH条件下胃蛋白酶已经变性失活　(2)活细胞的细胞膜具有选择透过性，台盼蓝分子不能被细胞吸收　紫檀芪使用浓度较低，相对副作用较小，同时该浓度处理对胃癌细胞的抑制率也比较高　持续给药　(3)促进Caspase-9前体转化为Caspase-9，启动细胞凋亡；加速Bax合成，引起线粒体破坏；抑制Bcl-2基因表达，促进细胞凋亡等 解析　(1)在动物细胞培养中，培养液中加入动物血清的主要作用是补充细胞生长所需要的未知营养物质。通入CO2的作用是维持培养液pH的基本稳定。在动物细胞培养液的pH条件下，胃蛋白酶已经变性失活。(2)台盼蓝拒染法检测活细胞的原理是：活细胞的细胞膜具有选择透过性，台盼蓝分子不能进入活细胞。在临床上，治疗药物剂量的选择以用药安全、有效且副作用小为前提，因此，临床治疗时紫檀芪浓度选择40 μmol/L。但由于该浓度时，紫檀芪对癌细胞的抑制率有限，因此需要注意持续给药一段时间。(3)分析图2，当细胞凋亡时，细胞中Bax蛋白增多、Bcl－2蛋白减少、 Caspase-9前体转化为Caspase-9。 2．豆科植物细胞壁中含有大量不能被猪消化的甘露聚糖。研究人员通过基因工程等技术培育出转甘露聚糖酶基因(manA)猪，主要流程如图，图中PSP为猪唾液腺分泌蛋白基因启动子，neo为新霉素抗性基因。请回答下列问题： (1)步骤①PCR过程中加入引物的原因是Taq酶___________。 (2)步骤②中选择将nA基因插入PSP后面的目的是_______。 步骤③常用的方法是______________。步骤④中使用的猪卵母细胞应处于____________________期。 (3)步骤⑤前需要对受体猪群进行同期发情处理，其目的是______________________。 步骤⑥中，科研人员发现选择4～6细胞期的胚胎进行移植成功率最高，最可能的原因是______________。 (4)与饲养普通猪相比，饲养转基因猪的优势是___________。 (5)有人提出本研究中使用新霉素抗性基因作为标记基因可能会引起安全性问题，因此最好在图示步骤______操作前利用相关技术敲除neo基因。 答案　(1)只能催化单个脱氧核苷酸连接到已有的脱氧核苷酸链上　(2)使manA基因能在唾液腺细胞中旺盛表达并分泌　显微注射法　减数第二次分裂中　(3)使受体猪群在预定时间内集中发情　正常情况下猪的受精卵在发育至4～6细胞阶段时进入子宫　(4)提高饲料的利用率，降低饲养成本　(5)④ 解析　(1)Taq酶是耐高温的DNA聚合酶，DNA聚合酶只能催化单个脱氧核苷酸连接到已有的脱氧核苷酸链上，因此通过PCR技术扩增目的基因时需加入一小段DNA片段作为引物。(2)根据题意，PSP为猪唾液腺分泌蛋白基因启动子，步骤②中选择将manA基因插入PSP后面的目的是使manA基因能在唾液腺细胞中旺盛表达并分泌。基因工程中将基因表达载体导入动物细胞(步骤③)