《奶牛卵母细胞体外成熟培养的研究论文》-毕业设计（论文）.docVIP

塔里木大学毕业论文 PAGE 1 l 目 录 TOC \o 1-3 \u 摘要 1 关键词 1 1前言 1 1.1影响卵母细胞成熟培养的因素 1 1.2卵母细胞的来源 2 1.2.1奶牛卵母细胞的成熟 2 1.2.2牛卵母细胞体外成熟的方法. 3 1.3卵母细胞的成熟判断 3 2材料及方法 3 2.1卵巢卵母细胞的采集 3 2.2成熟液的配置 3 2.3成熟卵的检查 4 3结果与分析 4 4 讨论 4 5结论 4 致谢 4 参考文献 5 奶牛卵母细胞体外成熟培养的研究 　 摘要：为研究孕马血清促性腺激素( PMSG)在奶牛卵母细胞的成熟过程中的作用。在牛卵母细胞成熟液中添加 0、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml PMSG 统计成熟率。结果表明，添加 PMSG各组与对照组相比，卵母细胞的成熟率均显著提高。而添加 10μg/ml、25μg/ml、75μg/ml组卵母细胞的成熟率之间差异不显著，50μg/ml组卵母细胞的成熟率最高。 关键词：牛；卵母细胞；体外成熟 1前言 牛在大多数情况下是一胎一仔，自然双胎的概率很小。其根本原因在于：牛的卵巢大多数情况下每次只排 1个卵，因而只可能有一个胚胎产生，这极大地影响了牛的繁殖性能。 而通过牛卵母细胞体外成熟技术能获得较多的卵子，与体外受精技术相结合，大大提高了牛的繁殖性能。Edwards在 1965年获得牛卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation，IVM）培养的成功。1982年，Brackett 等人首次报道用手术法收集牛卵母细胞进行体外受精，并产下活犊的试验。其后Iritani和niwa在报道体外成熟的卵母细胞进行体外受精后，又相继报道了卵母细胞的体外培养、受精、移植和妊娠，产下活犊的试验结果。牛卵母细胞的IVM和 IVF技术在牛胚胎生产中有很大发展潜力。随着体外受精技术的发展，牛卵母细胞的体外成熟显得愈来愈重要。近年来，Bols等(1995)，Bungartz等(1995)和Niemann等(1995)借助超声波横穿阴道从母牛卵巢吸取具有高的遗传性状的卵母细胞，经体外成熟、受精、培养以获得系谱清楚且具有高的可期望性状的胚胎。 随着哺乳动物体外受精、细胞核移植和外源基因导入等高新技术的不断深入,人们对成熟卵母细胞以及哺乳动物胚胎需求量日益增加，卵巢内丰富的卵泡资源是胚胎工程迅速发展的基础。通过卵巢卵母细胞体外成熟获取大量成熟卵母细胞，然后进行体外受精、体外生产胚胎愈来愈引起人们的注视。 1.1 影响卵母细胞成熟培养的因素 卵母细胞的成熟是一个复杂的，动态的过程，有许多代谢事件发生，除了进行积极的mRNAs转录、蛋白质合成外，还有其他一些物质的降解。在体外成熟培养中，通常以第一极体的排出来判断卵母细胞的成熟，其实这只是核成熟的标志。除了核成熟外，卵母细胞的胞质成熟也很重要，尤其是对用于核移植的卵母细胞而言，胞质的成熟直接关系到能否使供体核实现彻底的再程序化、重构胚能否维持正常的分裂发育。从这个意义上说，目前所用的卵母细胞成熟体系还不尽完善，一些对卵母细胞成熟和后续发育非常重要的物质不能完全合成。近年来，在卵母细胞体外成熟的研究中，人们的注意力主要集中在提高体外成熟的卵母细胞支持胚胎发育的能力上。 卵母细胞体外成熟中应用最广泛，效果稳定的基础培养液是TCM199。在牛上，TCM199 添加10%血清、促性腺激素和雌激素，卵母细胞的成熟率可达到90%( Fukuda，1990)。小鼠卵母细胞的体外成熟在CZB及KSOMaa中也可得到很好的效果。猪的卵母细胞成熟除用TCM19外，NCSU-23也被较多使用，虽然成熟率差别不大，但在TCM199中培养成熟的猪卵母细胞可更好的支持受精卵向囊胚的发育。这些培养液中都要添加动物血清，由于血清成分的复杂和难以确定，它对卵母细胞的成熟及后续发育的影响也是复杂多元的，这一点近年来倍受关注，因此人们正在努力寻找效果确切、不含血清的成熟培养液。研究显示，合成培养液 (如 SOFM、KSOM)中用BSA或 PVA及氨基酸代替血清作成熟培养液，可以使卵母细胞成熟，并能进行受精后的发育，用复合输卵管合成液(supplemental synthetic oviduct fluid medium，cSOFMaa)培养成熟的牛卵母细胞，发育到囊胚的能力与TCM199 +NCS培养成熟的卵母细胞相同，氨基酸的添加可以提高成熟卵母细胞的发育能力，增加囊胚中的细胞数量，提高卵母细胞中母型 mRNAs 的转录水平(Watson，2000)。Gardner等设计出了一种基础成熟培养液( G-Mat)，用重组蛋白以及透明质酸代替血清，培养牛卵母细胞，取得了理想的效果，不仅囊胚的发育率高于