基因定点诱变技术和DNA和蛋白质互作及定点突变介绍.pptVIP

五、基因定点诱变 定位诱变技术就是指按照设计要求，在体外将基因特定区域的碱基进行突变，这样就有可能在缺乏表型选择时进行遗传分析，以便于研究基因结构与功能的关系和基因表达调控的过程。其诱变技术有两种类型，即区域随机诱变和点突变。 ㈠寡核苷酸介导的定点突变技术 1.盒式诱变（casette mutagenesis） 利用一段人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段，取代野生型基因中的相应序列。 2.寡核苷酸引物诱变技术 用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作为引物，启动单链DNA的复制，新产生出来的心链就具有已发生突变的碱基序列。 ㈡ PCR点突变技术 1.重组PCR定点诱变法 该方法是利用四种引物，三轮PCR反应来进行的。操作较为繁琐。 2.引物PCR定点诱变法 该方法是利用三种引物，两轮PCR反应来进行的。 六、DNA与蛋白质互作分析 外源基因的功能分析涉及蛋白质与DNA的互作分析。 主要方法有： 酵母杂交系统 凝胶阻滞实验 DNaseI足迹实验 甲基化干扰试验 体内足迹实验 一）酵母双杂交系统（yeast two-hybrid system) 1. 原理： 真核生物的转录因子大多是由两个结构上分开、功能上独立的结构域组成的，即 DNA结合域（BD）和转录激活域（AD）。 单独地BD能与特定基因地启动区结合，但不能激活基因的转录，而由