中国实验诊断学20o6年9月第lO卷第9期.docVIP

精品文档 . 中国实验诊断学20o6年9月第lO卷第9期 原子力显微镜对正常细胞、 肿瘤细胞细胞膜表面形态结构的观察 1 材料与方法 1．1 主要材料与仪器 原子力显微镜：型号为NanoScope I]I a(Digital In—stmments Inc．，Santa Barbara，cA)，采用NSC—ll尖。倒置显微镜：CK2一TRC一3型(Olympus，JAPAN)。照相机(Olympus，JAPAN)． 1．2 细胞选择 人成纤维细胞(F1)cel1)，人宫颈癌细胞(Helaceu)，人乳腺癌细胞(Mcf7 cel1)，人成纤细胞癌变细胞(Ma．Fb)以上细胞均购于协和医院生物研究室。 1．3 方法 1．3．1 AFM标本的制备 福尔马林固定标本的制备：将细胞接种于置有盖被片的培养瓶中，常规培养，待细胞长满培养瓶底面的80％时，取出培养瓶中的细胞爬片，用2％福尔马林溶液冲洗3遍，再放主2％福尔马林溶液中室温下固定30 min，然后取出细胞爬片，贴于粘有双面胶的载玻片上，置于洁净空间晾干。 直接晾干标本的制备：由于细胞在短时间内完全干燥也是一种固定方法，所以我们采取5％葡萄糖溶液和枸橼酸盐缓冲液作为清洗液，洗掉细胞表面的培养基，然后将细胞晾干，方如下：用5％葡萄糖溶液(或枸橼酸盐缓冲液)冲洗细胞爬片3遍，然后将细胞爬片贴于粘有双面绞的载玻片上，置于较洁净空间晾干。 1．