选修1-2-2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数--2019.2.pptVIP

实例启示 1、在实验设计时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性 2、在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 （三）设置对照） 1、设置对照的目的 排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 2、对照实验概念 指除了 的条件外，其他条件都 的实验。没做处理的称为 ，做处理的称为 组。 被测试 相同 对照组 实验 　A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。 究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误。 另一种方案： 　将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 实验方案有两种 一种方案： 　可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的 四、实验设计 实验的具体操作步骤如下: 资料一.1.土壤取样? 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 （实验案例 ） …… 在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 2.制备培养基： 准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。 ? 资料 二.3.样品的稀释? 将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中，充分摇匀，吸取上清液1 mL，转移至盛有9 mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。 资料 二.样品的稀释? 由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。 　 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 　　答：这是因为土壤中各类微生物的数量是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。 将涂布好的培养皿放在30 ℃温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。 比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否产生如课本中图2-10的颜色反应。如果有则说明该选择培养基中确实含有能分解尿素的细菌。 资料三.4.微生物的培养与观察? 5.细菌的计数? 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 五、操作提示 无菌操作 做好标记 规划时间 六、课题成果与评价 （一）培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落 　　 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。 　　如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步分析产生差异的原因。 （二）样品的稀释操作是否成功 　　如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。 （三）重复组的结果是否一致 2提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。 课后练习P26 　　伊红—美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈深紫色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。 例如：鉴别大肠杆菌培养基 大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征 本课题