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菌落总数的测定 (GB 4789.2—2010) ;; 一、? 目的
1、??学习并掌握食品中菌落总数测定方法和原理。2?、了解菌落总数测定在对样品进行卫生学评价中的意义 。; 二、原理
1.菌落总数:是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后,所得1g或1mL检样中形成的细菌菌落总数。以 CFU/g(mL)来表示。
一定条件包括培养基成分、培养温度和时间、pH、是否需要氧气等。; 2 .菌落总数测定的卫生学意义
(1)菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。; (2) 食品中细菌菌落总数越多,则食品含有致病菌的可能性越大,食品质量越差;菌落总数越小,则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验,才能对食品做出较全面的评价。;三?、?材料;需灭菌器材:
1.试管1.5*15cm 3支 每支试管装9ml生理盐水 ,塞上硅胶塞,报纸包扎
2.500ml锥形瓶 1个 加225ml生理盐水 加棉塞,报纸包扎
3.吸量管桶(两组共用一个) 装12支1ml吸量管
4.培养皿桶 装10-12个培养皿(装满) 每组1个,共十个,剩下的组别自己用报纸包扎培养皿
5.培养基:胰蛋白胨0.75g 酵母浸膏0.375g 葡萄糖0.15g 琼脂2.25g 蒸馏水 150ml 装入250ml的锥形瓶,加棉塞,报纸包扎
6.研钵 1个、杵子1个、胶头滴管橡胶头2个 用报纸包扎
7.剪刀1把、镊子1把用报纸包扎
8.滤纸三张,用报纸包扎;四、??流程 ; 五、??步骤 ;; (二)?菌落记录方法 做平板菌落数记录时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后,求出同稀释度的各平板平均菌落数。
到达规定培养时间,应立即计数。如果不能立即计数,应将平板放置于0~4℃,但不要超过24h。 ;
1、?平皿菌落数的选择 选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿,大于300的可记为多不可计。
; 2、其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌??数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,则可以计算半个平板后乘以2,以代表一个平板的菌落数。; 3、当平板上有链状菌落生长时,如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限,则应作为一个菌落计,如存在有几条不同来源的链,则每条链均应按一个菌落计算,不要把链上生长的每一个菌落分开计数。 ; (三)菌落总数的计算
1、若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(mL)中菌落总数结果。;; 2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按公式(1)计算:;; 3、?若所有稀释度的平板菌落数均300,则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 ;; 4、若所有稀释度平板菌落数均30,则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数计算。
5、若所有稀释度平板均无菌落生长,则应按1乘以最低稀释倍数计算。 ;; 6、若所有稀释度均不在30~300之间,有的300,有的又30,则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 ;(四)?菌落计数报告方法 ;; 六、?结果;报告方式;酱油(GB/T2717-2003):
细菌菌落总数: ≤30000 CFU/mL
大肠菌群: ≤30MPN/100mL
肠道致病菌: 不得检出
;全脂奶粉、脱脂奶粉(GB5410-1999):
特级 一级 二级
细菌菌落总数:≤20000 ≤30000 ≤50000
(CFU/ml)
大肠菌群 ≤40 ≤90 ≤90
(MPN/100g)
肠道致病菌: 不得检出 不得检出 不得检出;巴氏杀菌乳(GB5408.1-1999)
细菌菌落总数: ≤30000 CFU/mL
大肠菌群: ≤90 MPN/100mL
肠道致病菌: 不得检出
;生活饮用水卫生标准(GB5749-2006)
菌落总数cfu/ml
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