1液相色谱原理基础知识.pptVIP

基础知识讲解内容 1、色谱基础知识 2、硬件基础知识 3、定量基础知识 4、维护基础知识 色谱发展史 20世纪初，俄国植物学家M.S. Tswett提出经典液相色谱法； 20-30年代，柱分配色谱和纸色谱； 50年代，气相色谱，薄层色谱； 60年代，凝胶渗透色谱及高效液相色谱； 70年代，高效毛细管气相色谱法； 80年代，电色谱； 90年代，光色谱。 色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术 流动相：携带样品流过整个系统的流体 固定相：静止不动的一相，色谱柱 液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法 适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析 流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用 HPLC简易流程图 HPLC特点 分离性能好 灵敏度高（10-9～10-12 g） 选择性高（同分异构，旋光异构） 分析速度快 进样量小（1-100 mL） HPLC分类 反相色谱（reversed phase chromatography） 离子对色谱（ion-pair chromatography） 正相色谱（normal phase chromatography） 离子交换色谱（ion exchange chromatography） 尺寸排阻色谱（GPC / GFC） 反相色谱 C18 (ODS) C8 (octyl) C4 (butyl) 苯基 TMS 氰基 相互作用力是什么? 疏水性 如果样品有 CH3CH2CH2--- : 碳链 : 芳香基 如果样品有 COOH : 羧基 NH2 : 氨基 OH : 羟基 反相色谱流动相的选择 优化水相（缓冲液）和有机相的比例非常重要 甲醇，乙腈和 THF 是常用的有机溶剂。 流动相极性变化对分离的影响 固定相极性变化对分离的影响 固定相极性变化对分离的影响 反相离子对色谱 原理：样品离子与流动相中离子对试剂的反离子生成疏水性离子对，而为反相色谱固定相保留 固定相：疏水性的苯乙烯/二乙烯基苯树脂或键合的硅胶 流动相：水（缓冲液） + 离子对试剂 + 有机溶剂 离子对试剂：所带电荷与待测离子相反 阴离子化合物 氢氧化四丁基铵 溴化四丁基铵 阳离子化合物 丁烷基磺酸钠 （C4） 戊烷基磺酸钠 （C5） 己烷基磺酸钠 （C6） 庚烷基磺酸钠 （C7） 辛烷基磺酸钠 （C8） 癸烷基磺酸钠 （C10） 十二烷基磺酸钠 （SDS） 反相离子对色谱流动相的选择 离子对试剂的类型 所带电荷与待测物质相反 离子对试剂的浓度 10-4~10-2 mol/L 在一定范围内，浓度越大，被分离物的保留值越大 流动相的 pH 反相离子对色谱应用 — 阴阳离子表面活性剂 — 大分子脂肪酸 — 烷基磺酸盐和芳香硫酸盐 — 含氮化合物 — 生物碱 — 水溶性维生素 — 酚类 正相色谱 硅 胶 柱 : 常用 氰 基 柱 : 常用 氨 基 柱 : 分析糖 二醇基柱 : 分析蛋白质 相互作用力是什么? 氢键力 如果样品有 COOH : 羧基 NH2 : 氨基 OH : 羟基 氢键力强 如果样品没有任何官能团，如碳水化合物 如果样品有大的基团, 由于空间位阻 氢键力弱 正相模式下流动相的选择 主要试剂 烷烃 （戊烷, 己烷, 庚烷, 辛烷） 芳香烃 （苯, 甲苯, 二甲苯） 二氯甲烷 氯仿 四氯化碳 辅助试剂 甲基-t-丁基醚 （MTBE）， 乙醚，四氢呋喃 （THF），二氧杂环乙烷， 嘧啶，乙酸乙酯，乙腈，丙酮，异丙醇，乙醇，甲醇 为了调整保留时间，可以选择主要试剂然后再加入辅助试剂。 流动相极性变化对分离的影响 反相 保留时间重现性好 固定相耐用 正相 对立体异构体有很好的分离 （Vitamin E等） 保留时间重现性稍差 离子交换色谱 原理：利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差 异来实现分离 固定相：离子交换树脂 流动相：水缓冲溶液（常用）或有机溶剂与水缓冲溶液的混合液 离子交换色谱所用的缓冲液： 阴离子分离：氢氧化物、硼酸盐、碳酸盐、酚盐和两性离子等 阳离子分离：矿物酸，如硝酸、盐酸、硫酸和甲基磺酸等 离子交换色谱作用力 离子交换色谱应用 生物领域 （蛋白质, 农药, 氨基酸分析） 离子分析 阳离子交换剂 强阳离子交换剂（SCX）（R-SO3-） 弱阳离子交换剂（WC