微生物生产抗生素应用.pptxVIP

资料收集： PPT制作： PPT演讲： ;目录;一. 抗生素定义;概 述;概 述;二、抗生素的生物来源;微生物产生抗生素;2、细菌产生抗生素 芽孢杆菌属：多粘芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌 假单胞菌属：铜绿假单胞菌（绿脓杆菌） 杆菌肽、粘杆菌素、多黏菌素等多肽类。 3、真菌产生抗生素 青霉属：青霉素、灰黄霉素。 头孢菌属： 头孢霉素;其他生物（动植物）产生抗生素;三、抗生素产生菌的选育 1、抗生素产生菌的分离 2、抗菌性试验 3、抗生素产生菌的改良 1)人工诱变 2)原生质体融合 3)体外DNA重组 ;体外DNA重组;四、抗生素的提纯;⑴抗生素提纯的基本步骤和原则 3个基本步骤：发酵液过滤和预处理、粗纯化、精制 4个原则：时间尽量短；采用适当较低浓度；条件适宜，pH适度，温度适宜；防止杂菌污染。 ⑵提取方法： 吸附、萃取、离子交换、沉淀、色谱分离、分子筛过滤、透析等。;五、青霉素的发酵工艺;1、青霉素的作用机制、抗菌谱及稳定性;2、菌种;2、菌种;3、当前青霉素的生产工艺流程;青霉素发酵工艺流程及发酵控制;（1）孢子制备;一级种子发酵：发芽罐，孢子萌发，形成菌丝 培养基：葡萄糖、玉米浆、碳酸钙、玉米油、消沫剂等。 接种量： 200亿孢子/吨培养基 空气流量：1：3 （m3/m3·min） 搅拌转速：300-350 r/min pH：自然 温度：27±1℃ 时间：40h ;（2）种子罐培养工艺;（3）生产罐培养工艺;发酵罐示意图;菌丝生长速度与形态、浓度;消沫; 青霉素的发酵过程控制十分精密，一般2小时取样一次，测定发酵液的pH、菌浓、残糖、青霉素效价等指标，同样取样做无菌检测，发现染菌立即结束发酵，视情况过滤提取，因为染菌后pH波动大，青霉素在几小时内就会被全部破环。;(4)青霉素的提取工艺;青霉素的提取工艺;②萃取工艺过程：二级逆流萃取 A、萃取原理： 分配定律，青霉素在水中溶解度小，易溶于醋酸丁酯、醇等有机溶剂中，青霉素盐易溶于水，不溶于有机溶剂。 青霉素在滤液中以盐存在，加入酸和醋酸丁酯，溶于有机相中，在醋酸丁酯中加入碳酸钾，6.8-7.4，形成盐转入水相中，实现反萃取。 ;B、影响萃取因素 pH：反复调节pH，青霉素不稳定，易发生降解、异构化、重排，β-内酰胺环是功能性。 温度：加热会加快其降解反应 工艺过程及浓缩倍数，级数越高、纯度越高但收率越低。 微生物污染：杂菌：β-内酰胺酶和青霉素酰胺酶 萃取时间：青霉素在水中的半衰期18.5min。;(5)青霉素的精制 制成碱金属盐：碱金属盐稳定性大；青霉素在水中的稳定性差，水解快。 1)结晶工艺： A、醋酸丁酯中直接结晶：加入醋酸钾--乙醇--碳酸钾、丁醇--水真空共沸蒸馏。 B、丁醇-水共沸结晶：青霉素的碱金属盐溶于水，在丁醇中不溶解，稳定，丁醇和水形成二元共沸物蒸出，丁醇带出水分，不断加入丁醇，可使水分不断减少，结晶析出。 2)过滤、洗涤、干燥 结晶后用真空抽滤来处理母液，并用丁醇洗涤。干燥采用真空双锥旋转干燥器 ;(6)溶媒回收 采用立式传质塔蒸馏回收。 ;一、斜面培养： 淀粉1％，硫酸铵0.3％、玉米粉0.6～1.0％、氯化钠0.3％、蛋白胨0.2％、琼脂2％、pH7.0～7.2 37℃培养7～10d，成熟的孢子灰色略带微红色。 一级种子培养： 豆饼粉2.5％、葡萄糖3％、淀粉4％、蛋白胨0.5％、酵母粉0.5％、硫酸铵0.5％、 ％、玉米粉0.2％、氯化钠0.3％、磷酸氢二钾0.06％、硫酸镁0.025％、豆油0.3％ 35 ℃培养72h，菌丝密集;二级种子： 豆饼粉2.2％、葡萄糖3％、淀粉4％、蛋白胨0.5％、酵母粉0.5％、硫酸铵0.1％、玉米粉0.8％、氯化钠0.3％、碳酸钙0.6％、豆油0.3％ 35℃，24h，接种量10％ 二、发酵罐培养 发酵培养基： 豆饼粉2.4％、葡萄糖3％、3.5％、蛋白胨0.5％、酵母粉0.5％、硫酸铵0.1％、玉米粉0.8％、氯化钠0.3％、碳酸钙0.6％、豆油0.15％，丙酸0.6％（分次加入） 60h前35℃，60h后33 ℃;菌丝繁殖期： 接种45h后，菌丝生长快，繁殖旺盛，迅速利用N、C，菌丝体密集成网状。 红霉素分泌期： 45h～150h，菌丝体生长减弱，并达到平衡，pH在7.2左右，c源利用较快，红霉素持续分泌。 菌丝自溶期： 菌体衰老，发酵液颜色较深，菌丝短，粘稠度较大，pH上升7.5，氨基氮上升。;三、红霉素的提取和精制;提取工艺 ;;3、醋酸丁酯液处理： 10％醋酸调节pH5～5.5，分层，去除醋酸丁酯液，在酸性环境下溶于水溶液中分层过滤 酸液处理 用10％氢氧化钠调节pH7～8，再加适量的