动物学——龙文敏06012.docVIP

PAGE PAGE 5 山西大学 2009届硕士研究生学位论文 蝗虫肠道菌群结构的分子生态学研究 作者姓名 龙文敏 指导教师 马恩波 教授 学科专业 动物学 研究方向 分子进化与分子毒理学 培养单位 生命科学与技术学院 学习年限 2006年9月—2009年7月 本研究得到国家自然科学基金（No.、国家自然科学基金（No.、山西省自然基金（No. 2009011048）的资助 二OO九年六月 PAGE 48 PAGE 47 Molecular ecological studies of the gut microbiota communities structure of the grasshopper A Dissertation Submitted to the Faculty of Shanxi In Partial Fulfillment of the Requirements for Degree of Master in Zoology School of Student Name Long Wenmin Superviser Prof. Ma Enbo Major Zoology Field of Research Molecular evolution and Molecular toxicology Department College of Research Duration 2006.9-2009.7 This dissertation was supported by grants from the National natural Science Foundation of China (No No., Natural Foundation of Shanxi (No.2009011048). 蝗虫肠道菌群结构的分子生态学研究 目录 目 录 TOC \o 1-3 \h \z \u 中 文 摘 要 I ABSTRACT III 第一章 前 言 1 1.1 昆虫肠道微生物研究概况 1 1.1.1 昆虫肠道共生菌分布的研究 1 1.1.2 昆虫肠道共生菌功能的研究 1 1.1.3 昆虫肠道微生物多样性的研究 2 1.2 蝗虫肠道微生物研究概况 4 1.2.1 蝗虫肠道微生物群落结构多样性研究 4 1.2.2 蝗虫肠道微生物功能的研究 5 1.3 肠道微生物研究方法 5 1.3.1 依赖培养的分析方法 5 1.3.2 不依赖培养的分子分析方法 6 1. 4 本研究的目的和意义 9 第二章 基于RCR-DGGE指纹图谱的分子生态学研究技术建立分析蝗虫肠道微生物群落结构的DNA提取方法 11 2.1 材料与方法 11 2.1.1 供试东亚飞蝗的采集及饲养 11 2.1.2 两种肠道微生物总DNA的提取方法 11 2.1.3 DNA检测及稀释 12 2.1.4 肠道细菌16S rRNA基因的扩增 12 2.1.5 肠道细菌组成的DGGE指纹图谱 13 2.1.6 变性梯度凝胶电泳的数字化分析 13 2.1.7 肠道微生物总DNA得率和群落结构的统计学分析 13 2.2 结果 14 2.2.1 Q法与B法提取DNA质量的比较 14 2.2.2 PCR扩增结果 15 2.2.3 DGGE电泳图谱 16 2.3 讨论 17 第三章 天津东亚飞蝗不同肠段微生物群落结构分析 21 3.1 材料和方法 21 3.1.1 供试样本 21 3.1.2 蝗虫肠道微生物总DNA的提取 21 3.1.3 肠道微生物优势细菌的扩增 21 3.1.4 不同肠段中细菌组成的DGGE指纹图谱 21 3.1.5 变性梯度凝胶电泳的数字化分析及群落结构的统计学分析 21 3.1.6 多变量统计分析技术 22 3.1.7 PCR-DGGE凝胶回收与测序 24 3.2 结果 24 3.2.1 东亚飞蝗不同肠段微生物总DNA的提取质量比较 24 3.2.2 东亚飞蝗不同肠段微生物16S rRNA基因——V3片段的扩增 25 3.2.3 东亚飞蝗不同肠段微生物群落结构变化规律研究 25 3.3 讨论 25 第四章 天津东亚飞蝗不同性别个体肠道微生物群落结构的比较研究 31 4.1 材料和方法 31 4.1.1 供试样本