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- 2019-11-02 发布于广西
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实验八 肌糖原的酵解作用 目的与要求 了解糖酵解作用在糖代谢中的地位和生理意义 掌握鉴定糖酵解作用的原理和方法。 动物淀粉,是动物的糖贮存库(体内能源库)。糖原的结构与支链淀粉有基本相同的结构,只是糖原的分支更多。 在动物的肝脏和肌肉中含量最大,当动物血液中葡萄糖含量较高时,就会结合成糖原储存于肝脏中,当葡萄糖含量降低时,糖原就可分解成葡萄糖而供给机体能量。 糖酵解(EMP)途径 肌糖原的酵解作用:即肌糖原在缺氧的条件下,经过一系列的酶促反应,最后转变成乳酸的过程。 肌糖原的酵解作用是糖类供给组织能量的一种方式。 1. 糖原→ ( 糖原磷酸化酶 ) → 1- 磷酸 - 葡萄糖→ 6- 磷酸葡萄糖,进入糖酵解。 1/n(C6H10O5)n+H2O 2CH3CHOHCOOH 催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉提取液中,而催化呼吸作用(即三羧酸循环)的酶系统,则集中在线粒体中,因此可用淀粉代替糖原。 影响显色的因素 1. 糖的影响 加Ca(OH)2 和CuSO4去除。 2. 蛋白质 加三氯乙酸(TCA)沉淀。 3. 无机离子 Mg2+是许多酶的辅助因子, 必定影响酶促反应速度。 Cu2+可增强乳酸的颜色反应。 试剂和器材 试剂: 0.5%淀粉溶液;20%TCA溶液, 1/15M磷酸缓冲液(pH7.4), 氢氧化钙(粉末),饱和硫酸铜; 浓硫酸;对羟基联苯试剂 。 器材 37℃ 恒温水浴, 沸水浴,冰水浴。 1. 加入少许液体石蜡隔绝空气,以1毫升/管为宜; 2. 37℃保温1小时; 3.为使糖沉淀完全,放置30分钟并不时振荡(封口膜); 4.在乳酸测定中,试管必须洁净、干燥,防止污染;4支试管洗净放入烘箱烘干 5.所用滴管大小尽可能一致,减少误差。若显色较慢,则可将试管放入37℃恒温水浴中保温10min,再比较各管颜色。 6.第二次过滤,EP管离心 思考题 人体和动植物体中糖的贮存形式是什么?实验时,为什么可以用淀粉代替糖原? 试述糖酵解作用的生理意义? * * 糖 原 是指细胞在胞浆中分解葡萄糖生成丙酮酸的过程,并伴有少量ATP的生成。 在缺氧条件下丙酮酸被还原为乳酸(lactate)称为糖酵解。 有氧条件下丙酮酸可进一步氧化分解生成乙酰CoA进入三羧酸循环,生成CO2和H2O。 无O2 2. 乳酸的鉴定(灵敏度1~5微克/毫升) 紫红色 材料 兔肉糜。 注意事项
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