基因工程酶学基础5.pptVIP

工具酶（instrumental enzyme of gene enginering）是应用于基因工程的各种酶的总称。 基因工程的操作，是在分子水平上的操作，是依赖一些酶(如限制性核酸内切酶，连接酶，DNA聚合酶等)作为工具对基因进行人工切割，拼接和扩增等操作。 到目前为止，常用的工具酶有300多种。 工具酶 一、限制性核酸内切酶及DNA分子的体外切割 二、ＤＮＡ连接酶及DNA分子的体外连接 三、DNA聚合酶 1. 限制性核酸内切酶 限制性内切酶是基因工程中不可缺少的工具酶，有人称之为“基因工程的手术刀”。 限制性内切酶切点专一，它作用于DNA分子，产生特异的DNA片段。 一把特殊的剪刀—限制性内切酶的发现阿尔伯(Arber)、史密斯(Smith)和内森斯(Nathans)，获1978年诺贝尔生理学和医学奖 限制性核酸内切酶的发现 E.coliB含有EcoB核酸酶和EcoB甲基化酶 当λ(k)噬菌体侵染E.coliB时，由于其DNA中有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列，被降解掉。 而E.coliB的DNA中虽然也存在这种特异序列，但可在EcoB甲基化酶的作用下，催化S-腺苷甲硫氨酸（SAM）将甲基转移给限制酶识别序列的特定碱基，使之甲基化。 EcoB核酸酶不能识别已甲基化的序列。 仍有少量phage λ (K)可在 E. coli B中生存，是因为E.coli B