ELISA基本原理方式实际操作与注意事项.pptVIP

ELISA;1.　ELISA的原理;2.　ELISA的类型; 根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体 条件，可设计出各种不同类型的检测方法;双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法 ;双抗体夹心法测抗原; 间接法测抗体  间接法测抗体主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。; 间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血液中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白也会因竟争吸附而影响包被效果。; 间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性IgG 。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭固相上的空余间隙。另外，