第三章 预处理、细胞破碎和固液分离.pptVIP

影响液－固分离的因素 1.微生物种类 含真菌菌体或絮凝蛋白，过滤；酵母，离心；细胞碎片，用一般的过滤或离心方法效果很差，预处理，增大粒子 2.发酵液的黏度 分离速度通常与粘度成反比 3.发酵液的pH、温度和加热时间等 思考题 1、细胞破碎主要有那几种方法？ 2. 在生化工业中常用的过滤方式哪两种？各自有何特点？ 3. 离心分离分哪两大类？ 第三章 生物材料的预处理、细胞破碎和液固分离 掌握：细胞破碎的方法和常规固液分离技术 熟悉：生物材料预处理方法 第一节 生物材料的预处理 一、预处理的目的和要求 生物材料中的生化组成数量大、种类多，目的物与杂质的理化性质十分接近，分离纯化较困难 目的——改变料液的流变特性，以及除去对后面纯化有影响的杂质 要求——防止目的物的失活 二、动物材料的预处理 1.用绞肉机将事先切成小块的组织绞成组织糜 2.胞内产物需通过特殊的匀浆才能提取 三、细胞培养液的预处理 目的：去除可溶性黏胶状物质和某些无机盐 1.细胞和蛋白质的处理 （1）加入凝聚剂 某些无机盐可使细胞、细胞碎片和蛋白质等胶体颗粒发生凝聚作用，胶粒带负电，所以加入阳离子可以促进其凝聚 常用凝聚剂：AlCl3·6H2O，FeCl3，ZnSO4，MgCO3等 胶粒稳定存在的原因 带有相同电荷，产生电排斥，阻止粒子之间的聚集 表面的水化作用，形成了粒子周围的水化层，阻碍胶粒间的直接聚集 无机盐促进胶粒沉淀的原因 加入相反电性的电解质，中和胶粒的电性，降低了双电层的排斥力 水化作用，破坏胶粒周围的水化层 （2）加入絮凝剂 长链线状结构的有机高分子化合物，易溶于水，长链上含有相当多的活性功能团。 加入絮凝剂，胶粒强烈地吸附在表面的功能团上，产生架桥作用，形成絮凝团。 常用絮凝剂：壳聚糖、海藻酸钠、聚丙烯酸等 （3）变性沉淀 物理因素：热、紫外线照射、高压、表面张力、化学因素，使蛋白质生物活性丧失，溶解度降低。 例： 链霉素生产中，ph 3-3.5，加热温度70-75度，维持半小时以凝固蛋白质，过滤 速度可提高3倍，粘度降低到原来的六分之一。 （4）吸附 加入吸附剂或反应剂除去杂蛋白 活性炭除去热原；或反应剂反应生成沉淀吸附蛋白 例：在四环素的发酵液中加入硫酸锌，生成胶状沉淀，能将杂蛋白和菌体等粘附其中除去。 （5）等电点沉淀 蛋白质是一种两性物质，在酸性溶液中带正电，在碱性溶液中带负电荷，在某一ph时净电荷为0，溶解度降低，沉淀析出。 例硫酸软骨素制备，软骨提取出来盐解后调节ph2-3，搅拌10min，静止后过滤，除去酸性蛋白。 （6）加各种沉淀剂沉淀 某些化学试剂能与蛋白质结合形成复合物沉淀，在酸性溶液中，蛋白质与一些阴离子结合形成沉淀；在碱性溶液中，能与一些阳离子结合形成沉淀 2.多糖的去除 粘度大，利用酶将多糖转化为单糖来提高过滤速度，也可用表面活性剂使多糖沉淀 例 去甲万古霉素发酵液中加入0.025%的淀粉酶，搅拌30min，在加入2.5%助滤剂，提高过滤速度 3.高价金属离子的去除 Ca2＋ ，Mg2＋ ， Fe3＋等，影响产品质量，尤其是后续工艺为离子交换法时，降低树脂的交换容量 （1）离子交换法 阳离子交换树脂可以除去某些离子 例 土霉素的发酵液中通过122树脂时，去除部分Fe3＋ ，同时吸附色素，提高滤液质量。 （2）沉淀法 形成不溶性的盐类，例 Ca2＋ ，常加入草酸钠或草酸，形成草酸钙沉淀 目的：使胞内产物获得最大程度的释放 方法 技术 原理 效果 成本 举例 机 械 法 匀浆法 细胞被搅拌器劈碎 适中 适中 动物组织及动物细胞 研磨法 细胞被研磨物磨碎 适中 便宜 超声波法 用超声波的空穴作用使细胞破碎 适中 昂贵 细胞悬浮液小规模处理 高速匀浆法 使细胞通过的小孔，使细胞受到剪切力而破碎 剧烈 适中 细胞悬浮液大规模处理 珠磨破碎法 细胞被玻璃或铁珠捣碎 剧烈 便宜 细胞悬浮液和植物细胞大规模处理 第二节 细胞破碎 方法 技术 原理 效果 成本 举例 物理法 生物法 化学法 渗透冲击 渗透压破坏细胞 温和 便宜 血红细胞的破坏 干燥法 细胞膜渗透性变化 剧烈 低 冻融法 胞内冰晶引起细胞破裂 温和 低 酶消化法 细胞壁被消化，使细胞破碎 温和 昂贵 组织自溶法 组织中的酶改变破坏细胞结构 温和 低 增溶法 表面活性剂溶解细胞壁 温和 适中 胆盐作用于大肠杆菌 脂溶法 有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳 适中 便宜 甲苯破碎酵母细胞 碱处理法 碱的皂化作用使细胞壁融解 剧烈 便宜 制丙酮粉