蛋白质构造与功能关系.pptVIP

上述Hb与O2结合后，Hb的构象发生变化，这类变化称为变构效应，即通过构象变化影响蛋白质的功能。像血红蛋白这种具有变构效应的蛋白质称为变构蛋白（allosteric protein）。血红蛋白的这种变构效应能更有效地行使其运氧的生物学功能。 血红蛋白的变构效应使其有利于氧的运输 总之，各种蛋白质都有特定的空间构象，而特定的空间构象又与它们特定的生物学功能相适应，蛋白质的结构与功能是高度统一的。 1.5 蛋白质的理化性质及分离纯化 1、蛋白质的两性电离和等电点 蛋白质与氨基酸相似，也具有两性电离的性质。蛋白质的多肽链含有末端氨基和羧基，一些侧链上含有可解离的基团，有的可以接受氢离子，有的可以电离出氢离子，因此蛋白质具有酸碱两性电离的性质。它的两性电离比氨基酸复杂。 对某一蛋白质而言，在某一pH下，当它所带正负电荷相等的时候，该溶液的pH就称为该蛋白质的等电点。 蛋白质的等电点的大小与蛋白质的氨基酸组成有关。 蛋白质的性质及其应用 2、蛋白质的高分子性质 蛋白质溶液有许多高分子溶液的性质，如：扩散慢、易沉降、 粘度大、不能透过半透膜，在水溶液中可形成亲水的胶体。 ????蛋白质胶体溶液的稳定因素：水化膜、带电荷。当破坏这两个因素时，蛋白质中从溶液中析出而产生沉淀。 透析 ① 透析法：把混有小分子杂质的蛋白质样品溶液装在用玻璃纸，火棉纸等合成材料制成的半透膜透析袋里，然后放入流动的（或经常更换的）蒸馏水中，袋内的小分子杂质会不断扩散到半透膜外，直至完全排净，而蛋白质则留在袋内得到纯化。 ② 超滤法：是利用一种特制的半透膜，在外加强大压力作用下，迫使溶液中小分子透过而大分子则被阻留在滤膜之上而使之纯化。 如：用(NH2)2SO4分级后的，需除去(NH4)2SO4应采用上述两种方法之一即可。 3、蛋白质的沉淀作用 ?使蛋白质从溶液中析出的现象称为沉淀，方法有： 1）. 盐析：在蛋白质的水溶液中，加入大量高浓度的强电解质盐如硫酸胺、氯化钠、硫酸钠等，使蛋白质从溶液中析出，称为蛋白质的盐析。而低浓度的盐溶液加入蛋白质溶液中，会导致蛋白质的溶解度增加，该现象称为盐溶。 盐析的机理：破坏蛋白质的水化膜，中和表面的净电荷。 盐析法是最常用的蛋白质沉淀方法，该方法不会使蛋白质产生变性。 2）.生物碱试剂沉淀法（条件：pH稍小于pI） 生物碱是植物组织中具有显著生理作用的一类含氮的碱性物质。能够沉淀生物碱的试剂称为生物碱试剂。生物碱试剂一般为弱酸性物质，如单宁酸、苦味酸、三氯乙酸等。 生物碱试剂沉淀蛋白质的机理：在酸性条件下，蛋白质带正电，可以与生物碱试剂的酸根离子结合而产生沉淀。 “柿石症”的产生就是由于空腹吃了大量的柿子，柿子中含有大量的单宁酸，使肠胃中的蛋白质凝固变性而成为不能被消化的“柿石”。 3）.弱酸或弱碱沉淀法：用弱酸或弱碱调节蛋白质溶液的pH处于等电点处，使蛋白质沉淀。 弱酸或弱碱沉淀法机理：破坏蛋白质表面净电荷。 4）.有机溶剂沉淀法：在蛋白质溶液中，加入能与水互溶的有机溶剂如乙醇、丙酮等，蛋白质产生沉淀。 有机溶剂沉淀法的机理：破坏蛋白质的水化膜。 有机溶液沉淀蛋白质通常在低温条件下进行，否则有机溶剂与水互溶产生的溶解热会使蛋白质产生变性。 5）.重金属盐沉淀（条件：pH 稍大于pI为宜）：在蛋白质溶液中加入重金属盐溶液，会使蛋白质沉淀。 重金属沉淀法的机理：重金属盐加入之后，与带负电的羧基结合。 重金属沉淀蛋白质会使蛋白质产生变性，长期从事重金属作业的人应多吃高蛋白食品，以防止重金属离子被机体吸收后造成对机体的损害。 ?4、蛋白质的变性作用 1）.蛋白质变性的概念：天然蛋白质受物理或化学因素的影响后，空间构象发生变化，使其失去原有的生物活性，并伴随着物理化学性质的改变，这种作用称为蛋白质的变性。 2）.使蛋白质变性的因素 a. 物理因素：高温、高压、射线等 b. 化学因素：强酸、强碱、重金属盐等 3）.变性的本质： 分子中各种次级键断裂，使其空间构象从紧密有序的 状态变成松散无序的状态，一级结构不破坏。 4).蛋白质变性后的表现： A 生物学活性消失B 理化性质改变：溶解度下降，粘度增加，紫外吸收增加，侧链反应增强，对酶的作用敏感，易被水解。 5、蛋白质的颜色反应 蛋白质的颜色反应主要与其定性、定量测定有关： a.茚三酮反应：多肽与蛋白质都能与之反应生成紫红色化合物。 b.双缩脲反应：多肽与蛋白质都能和双缩脲试剂反应，随着肽键的数目越多，颜色依次为粉红、紫红、紫、蓝。 c.酚试剂反应：多肽与蛋白质与酚试剂生成蓝色的化合物。 另外，前面提到的氨基酸颜色反应蛋白质都具有。 双缩脲反应 Cu2+ (硷性溶液) 红紫色络合物 蛋白质在碱性溶液中也能