16s鉴定细菌的种属.pptVIP

利用16S rDNA鉴定细菌的种属 1.什么是 16S rDNA？ 16SrRNA为原核生物核糖体RNA的一个亚基，16SrDNA就是编码该亚基的基因。 原核生物的rRNA含有3种类型：23S、16S、5S rRNA，它们分别含有2900、1540和120个核苷酸。 2.用16S rDNA进行细菌鉴定的原因 16S rDNA在原核生物中普遍存在。 16 S rDNA的相对分子量大小适中，约1500 bp，便于序列分析。 在16S rRNA分子中， 既含有高度保守的序列区域，又有中度保守和高度变化的序列区域，因而它适用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究。 bp=base pair 图 16S rDNA基因组成（灰色为保守区，绿色为可变区）  16S rDNA基因全长1542 bp，由9个可变区和10个保守区组成。其中保守区反映了生物物种间的亲缘关系，而可变区则表明物种间的差异，且变异程度与细菌的系统发育密切相关。 DNA的提取 挑取单菌落,然后置于装有100 μLPrepMan Ultra的离心管中,涡旋震荡混匀30s左右，然后100℃水浴10min 后，以离心机最大转速离心3min，取10μL上清液与490μL ddH2O（即稀释50 倍），混匀作为下步PCR 的模板DNA 。提取的DNA 于-20℃保存。 检测：核酸蛋白仪/琼脂糖凝胶电泳 1525R 5 AAG GAG GTG WTC CAR CC 3 PCR 反应条件 试剂使用量（ 20μL体系） 模板DNA （10ng~100ng） 2μL Taq 酶(5U/μL) 0.2 μL 10×Taq Buffer(Mg2+) 2 μL dNTPs(2.5mM) 1 μL 引物F(10 μM) 0.5 μL 引物R(10 μM) 0.5 μL ddH2O 13.8 μL 1min30s 判断16Sr DNA序列扩增是否成功:经琼脂糖凝胶电泳在1500 bp附近出现条带，说明16s rDNA已经扩增成功。 /