20103病毒遗传分析.pptxVIP

第3章　病毒遗传分析;病毒的基因组结构;病毒的复制过程;T4 噬菌体对E.coli的侵染 ;病毒复制的模板链;第一节　T4噬菌体;; T4噬菌体的DNA是线性排列的，可是它的连锁图却是环状的。 1、末端冗余: 染色体的末端是相同的，即它们是冗余的（如abcdefg……wxyzabc）。 2、环状排列:每个染色体的末端是不同的如一个染色体可能是abcdefg……wxyzabc，而另一个染色体的顺序可能是defghi……xyzabcdef等。 ;;在感染初期，线状的亲代DNA分子经过几轮DNA复制产生单位长度再加末端重复的子代分子，接着子代分子的重复末端之间重组，形成了很长的T2或T4基因组多连体(conca temers)，即串连重复顺序，它们自身再进行复制而重组形成更长的多连体； ; 感染后期，子代噬菌体的头部蛋白将这些多连体DNA分子包装起来，直到完全装满为止，每个噬菌体颗粒能包装多长的DNA分子取决于壳体本身，通常填滿头部所需的DNA超过从a到z的一套基因组，对在z后面的基因仍有空间可以包装，于是又继续包装基因a、b、c，至头部被装满时将DNA切断，由此可以看到这个病毒粒子是基因a、b、c冗余的，下一个病毒粒子将接从d起始的DNA分子开始包装至c，然后继续到d、e、f，这个病毒是d、e、f冗余的，再下一个病毒粒子从g开始包装，冗余g、h、i基因等等。 这种头部满装机制(headful mechanism)的特殊DNA包装方式就解释了噬菌体颗粒中基因的末端冗余和基因次序的环状排列：所有的子代病毒都携带有冗余DNA分子，及这种分子是不同基因冗余的。;证据一 ;证据二 ;有关噬菌体感染的研究方法 ;双层平板法分离细菌病毒（噬菌体）的技术（噬菌斑）;用单层细胞进行 培养感染噬菌体;2、一步生长曲线的实验 　　　　　　　(one-step-growth experiment) 定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线称为一步生长曲线。该曲线可以用来确定噬菌体的潜伏期、裂解期和裂解量。;病毒复制的一步生长曲线;3、单菌释放实验(single burst experiment) 用来定量描述单个细菌释放噬菌体的数量;４、重组测验(recombination test) 噬菌体突变型 ;E.coli B;５、互补测验(complementary test);６、缺失作图(deletion map);第二节???λ噬菌体;一、 ?噬菌体基因组与原噬菌体;Lambda噬菌体的遗传图谱;λ噬菌体基因组的结构 粘性末端 寄主细胞内环化 COS位点; 环化状态下,λ噬菌体DNA分子的长度为48,502碱基对;例如，头部、尾部、复制及重组四大功能的基因，各自聚集成四个特殊的基因簇。 ;;(二)、 ?原噬菌体与合子诱导 1、?原噬菌体： 2、合子诱导： Hfr(λ)? F-→受体菌裂解(λ进入F-) Hfr(λ)[F因子整合、λ原噬菌体]，F-[无F];(三)、原噬菌体的插入与切除;;位点特异性重组;-GCTTTTTTATACTAA- -CGAAAAATATGATT-;BOB’;整合态;?二、λ噬菌体DNA的复制 ;;λ滚环复制的晚期 ;四、基因的转录与调控;后早期转录;;晚期转录;五、λ噬菌体溶源途径与裂解途径的调节;;CI阻遏蛋白在右操纵基因的排列 关闭PR和PL,促进RNA聚合酶结合PRM启动子,激活自身转录;;lambda DNA 整和到宿主染色体;;λ噬菌体的诱导和从宿主染色体DNA上的切离;PL和PR分别负责启动子向左和向右的转录； PRE和PRM是转录cI基因的两个启动子， PRE主管建立溶源， PRM主管维持溶源； PI启动转录int基因； P’R负责晚期基因的转录。;PL和PR起始早期转录 产生出编码N蛋白和Cro蛋白的mRNA;λ噬菌体赖以发展作为基因克隆载体: 非必要基因由外源基因取代所形成的重组噬菌体DNA，可以随着寄主大肠杆菌细胞一道复制和增殖，而且在其溶源周期中，它们的DNA是整合在大肠杆菌的染色体DNA上，成为后者的一个组成部分。;第三节 反转录病毒 ;一、反转录病毒的毒粒结构 ;反转录病毒的基因组 ;gag编码病毒粒子基质蛋白、衣壳蛋白、核酸结合蛋白 pol编码反转录酶、整合酶和蛋白酶 env编码病毒外膜蛋白;R U5 PBS gag pol env U3 R;反转录病毒的生活周期;R U5