cdna末端快速扩增技术race精编版.pptVIP

* * * * * cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE) 张晓玲 技术背景 基本RACE 原理和方法 样品要求 RACE 产物的鉴定和全长 cDNA 的获得 基本RACE原理 技 术 背 景 得到某基因的片段、全长或近全长cDNA的方法： 建立和筛选cDNA 和DNA 文库。 利用GenBank 数据库中的表达序列标签(express sequence tags , ESTs) 拼接出全长或近全长cDNA 。 是多聚酶链式反应即PCR。 cDNA 末端快速扩增(RACE) 技术。 用RNase 保护、S1 核酸酶谱和引物延 伸等方法来保证mRMA 5′末端的获取，但又需要大量的mRNA。 基本RACE 原理和方法 利用Oligo (dT) 对mRNA 进行反转录的同时在两头加上通用接头(引物) ， 从而可利用基因特异的引物 (gene specific primer，GSP) 通过PCR 反应快速获得 目的序列的5′端和 3′端。 RACE流程 5′-RACE法原理图 （1） （2） （3） （4） RNase H 样品要求： ◇ 提取Total RNA的材料要新鲜，采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂。 ◇ Total