《补血草MT基因表达与重金属耐受性间的联系研究》-毕业论文（设计）.docVIP

【摘要】： 补血草是一种耐干旱和盐碱的植物，含有的化学成分十分复杂，其中包括金属硫蛋白。金属硫蛋白是由微生物和植物产生的 金属结合蛋白，富含半胱氨酸的短肽，对多种重金属有高度亲和性。它是分子质量较低，半胱氨酸残基和金属含量极高的蛋白质。与其结合的金属主要是镉、铜和锌，广泛地存在于从微生物到人类各种生物中，其结构高度保守。 本实验通过将补血草处于盐胁迫条件下，使其相关的抗逆基因大量表达，进而把全RNA反转录（得到cDNA）, 通过基因特异性引物，PCR扩增金属硫蛋白基因MT16、MT42、MT82，导入到T载体中，转入DH5α大肠杆菌扩增，提取质粒后，测序验证目的基因，然后再l连入PGEX4T-1载体中，构建金属硫蛋白的原核表达载体，重组载体转入BL21大肠杆菌中，在含有重金属的平板上点菌，通过观察菌株的生长状况来研究MT基因表达与重金属耐受性间的联系。 【关键词】： 补血草 金属硫蛋白 PGEX4T-1载体 过量表达载体 Abstract： Limonium,a plant resistant to drought and salinity,has many special genes related with the response to drought and salinity, including the metallothionein . Metallothionein produced by microorganisms and plant metal-binding protein, cysteine-rich peptides, has high affinity for heavy metals. It is a low molecular weight, cysteine residues and high metal content of the protein. Combined with the metal is mainly cadmium, copper and zinc, widely present in various organisms from microbes to humans, its highly conserved structure. In this experiment,metallothionein gene MT16, MT42, MT82 from Limonium sinense was cloned and used to constructMT:: PGEX4T-1 fusion-expression vector .and then, fusion-expression vector was imported into Escherichia coli BL21, and used to observe the growth conditions on medium containing heavy metals to study gene function. key words： Limonium metallothionein PGEX4T-1 fusion-expression vector 目录 TOC \o 1-3 \h \z \u 【摘要】： 1 【关键词】： 1 Abstract 2 key words： 2 目录 3 1简介 4 1.1 补血草简介 4 1.1.1补血草植物资源介绍 4 1.1.2补血草属植物化学成分 4 1.1.3补血草属植物资源药用价值 5 1.2 金属硫蛋白简介 5 1.2.1金属硫蛋白定义 5 1.2.2 植物金属硫蛋白的基本功能 5 1.2.3植物金属硫蛋白的特性 6 1.2.4. 植物MT分类 6 1.2.5植物金属硫蛋白的应用前景 7 2 实验材料与方法 7 2.1 实验仪器、材料和试剂 7 2.1.1 实验仪器 7 2.1.2 实验材料 8 2.1.3 试剂 8 2.2 实验步骤 10 2.2.1植物材料的处理 10 2.2.2补血草总RNA的提取 10 2.2.3 反转录 10 2.2.4 PCR扩增目的基因 11 2.2.5 目的片段连接到T载体上 12 2.2.6 大肠杆菌超级感受态细胞的制备 12 2.2.7 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 13 2.2.8 碱裂解法提取质粒 13 2.2.9 质粒酶切检测 13 2.2.10 将检测有目的片段的重组质粒送测序公司测序 14 2.