二硫键的形成与蛋白质的氧化折叠.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（６ｓ）：２５９～２６４ 二硫键的形成与蛋白质的氧化折叠 许成钢　范晓军　付月君　梁爱华 （山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室　太原　０３０００６） 摘要　二硫键在稳定蛋白质构象和保持蛋白质活性方面起重要作用，但是天然二硫键的形成是 许多蛋白正确折叠中的限速步骤。随着对二硫键异构酶和折叠中间体研究的深入，富含二硫键 蛋白的折叠机制逐渐为人们所认识。本文着重从体内二硫键的形成和体外蛋白质的氧化折叠两 个方面对二硫键蛋白的折叠机制及其在基因工程中的实践应用等做一综述，对深入研究提高富 含二硫键的重组活性蛋白质的产率起重要指导意义。 关键词　二硫键　二硫键形成相关蛋白（Ｄｓｂ蛋白）　二硫键异构酶　氧化折叠 中图分类号　Ｑ５１ 　　在细胞中，蛋白质成功折叠要突破一些障碍，首先 硫键蛋白的氧化折叠途径具有多样性。本文主要综述 是拥挤的细胞质。从核糖体上合成含有暴露的疏水表 了富含二硫键蛋白质在体内二硫键的形成和体外氧化 面的新生肽链倾向聚合，为了防止该过程，细胞拥有一 折叠机制的研究进展，并对其在提高重组活性蛋白产 套复杂分子伴侣机制来帮助新生肽链折叠。然而对于 率中的应用进行了讨论，二硫键蛋白折叠机制的研究 许多分泌蛋白来说，另外一个障碍是其二硫键的形 不仅为重组蛋白质工业化生产奠定了理论基础，而且 ［１］ 成 。许多蛋白质和多肽如酶类、生长因子、激素或毒 为进一步理解蛋白质折叠揭示生命第二遗传密码，并 素等必须分泌到细胞外才能发挥功能。为了避免细胞 最终阐明分子生物学中心法则做出重要贡献。 外不利环境的影响，它们采取了一些防御措施来阻止 １　体内二硫键蛋白的氧化折叠 其变性和蛋白降解，例如二硫键和糖基化。二硫键的 引入不仅能够从构象上固定多肽链的骨架，而且可以 １．１　大肠杆菌中二硫键的形成 改善多肽的热动力学稳定性，这种热稳定性能够更好 　　大肠杆菌细胞质内的蛋白质很少含有二硫键，可 地抵抗极端环境如高温、酸性或碱性 ｐＨ、高浓度有机 能是因为半胱氨酸残基在蛋白质的催化位点起关键作 ［２］ 溶剂等 。但是，非正确二硫键的形成可导致蛋白质 用，如果形成二硫键将使蛋白失活。因此，为了阻止氧 ［３］ 错误折叠和聚合，并易被蛋白酶降解 。 化剂可能伤害细胞质内的蛋白，Ｅ．ｃｏｌｉ可通过一些途径 　　在体外缺乏分子伴侣和折叠酶的条件下，蛋白质 来保持这些蛋白的还原性，包括硫氧还蛋白／硫氧还蛋 能够自发地折叠到天然状态，说明蛋白质的氨基酸序 白还原酶系统和谷氧还蛋白／谷氧还蛋白还原酶系 列包含其三维结构信息，即第二遗传密码。蛋白质如 ［６］ 统 。细胞质内谷胱甘肽的浓度约为５ｍｍｏｌ／Ｌ，ＧＳＨ／ 何进行氧化折叠，形成天然的构象，是当今生命科学研 ＧＳＳＧ比率为５０／１～２００／１，能够保持其相对还原的状 究的一个热点。二硫键的形成使富含二硫键的蛋白质 ［７］ 态，阻止二硫键的形成 。 折叠速度减慢，与其它蛋白相比，富含二硫键的蛋白质 　　相反，当蛋白分泌到周间质时被氧化。周间质中 的折叠中间体更容易捕获，便于蛋白质的折叠研 包含一个Ｄｓｂ蛋白家族，能够催化新生肽链二硫键的 ［４，５］ 究 。目前通过对许多蛋白模型详细的研究发现二 形成。大多数周间质Ｄｓｂ