开发测定睾酮与二氢睾酮临床研究方法.pdfVIP

[ 技术简报] 开发测定睾酮与 二氢睾酮临床研究方法 artijn van Faassen Maarten van den Noort和Ido Kima 荷兰格罗宁根大学医学中心 目的 配有在线SPE的LC/MS无需进行衍生化步骤即可 开发血浆样品中睾酮与二氢睾酮(DHT)的 实现雄激素的直接测定。 测定方法。 背景 睾酮是一种雄性激素,属于类固醇激 素，是主要的男性性激素，也是一种 同化激素(图1)。 OH OH 在男性体内，约有5%的睾酮将发生5α 还原，形成更强效的雄激素二氢睾酮 H H (DHT)(图1)。 H H H H 测定雄性类固醇激素及其相关代谢物 O O H 是一个很大的挑战，特别是儿童和女 性体内的含量极低。类固醇的免疫方 睾酮 二氢睾酮 法检测类固醇激素通常灵敏度和特异 性较低。而传统LC/MS分析手段则需要 图1：雄激素的结构。睾酮在5α还原酶的作用下a环中的双键发生还原得到二氢睾酮 进行衍生化步骤和/或冗长复杂的样 (DHT)。 品制备。 在此次研究中，我们开发出了一种测 定血浆中睾酮和DHT 的研究方法。此 方法可通过LC/MS直接测定男性和女性 样品中生理水平下的这两种雄激素， 无需再进行衍生化处理。 [ 技术简报] 方法详情： LC/MS系统配置： LC 系统：ACQUITY UPLC® 质谱仪：Xevo® TQ-S 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C 18, 1.7 µm, 2.1 x 50 mm 样品制备： ACQUITY UPLC在线SPE管理器(OSM) SPE ： MassTrak™ C OSM小柱 8 样品预处理： 200 µL血浆 20 µL 内标(d3睾酮；C d3 DHT) 13 300 µL硫酸锌: 甲醇溶液； 离心沉淀蛋白；移取上清液 用水稀释至1 ml 最终样品进样量为25 µL 色谱条件 溶剂A ： 10% 甲醇+0.05% 甲酸 溶剂B： 甲醇+0.05% 甲酸 流速： 0.5 ml/min 时间 %A %B 0 60 40 3.0 0 100 4.0 0 100 4.1 60 40 在线SPE条件 活化 步骤1：0.5 mL 甲醇，流速为4 mL/min 步骤2：2.0 mL Magic Mix*，流速为3 mL/min 平衡 1.0 mL水，流速为4 mL/min 上样