《影响酶促反应的因素》-精选课件(公开).pptVIP

* 实验二十二 影响酶促反应的因素 ——温度、pH和抑制剂 一、温度对酶作用的两个方面 ??? 和一般化学反应一样，酶促反应在一定的温度范围内，其反应速度随温度的升高而加快。通常温度每增加10 ℃，酶促反应速度增加1～2倍。其机理在于温度升高使活化分子含量提高，从而加快分子间的反应速度。另一方面：酶是蛋白质，遇热易变性，随着温度的升高，酶蛋白热变性随之加快，通过减少有活性酶的含量而降低了酶促反应速度。温度对酶促反应速度的影响是以上两方面综合作用的结果。 二、酶最适温度的定义 ??? 在一定条件下，每一种酶在某一特定的温度时，其活性最大，该温度称为酶的最适温度。酶的最适温度不是酶的特征物理常数，也不是一个固定不变的常数。其数值受酶工作的时间、底物种类、浓度、缓冲液种类等的影响。 四、酶的最适pH 固定酶反应的其它条件，在不同pH处测定酶反应速度，可得各种类型的酶活性与pH关系 生化学家将酶活性最高处的pH称为最适pH。一般来说，血清中大多数酶最适pH接近中性（pH6.5-7.5）。有些酶在最适pH处活性变化尖锐明显，也有些平坦宽广。测定酶活性浓度时一定要选择在最适pH处，不仅因为此处酶反应速度最大，测定灵敏度最高，还因为此处酶活性变化的斜率最小，如反应体系中出现pH变化时，对测定结果影响最小。 五、pH对酶的作用 当pH变化时，可影响到底物、酶、酶-底物复合物的解离状态和构型，甚至还可能影响到各种辅因子，从而影响酶活性。 　　PH对酶还有一个重要的作用，就是影响酶的稳定性。 最适pH并非是酶的特征性常数，易受多种因素影响而改变，如缓冲液的种类、底物浓度、温度等，在研究pH对酶稳定性影响还应注意到酶浓度高低，在低浓度时，酶易解离为单体，常比多聚体更易灭活。 六、抑制剂对反应速度的影响 凡能使酶的活性下降而不引起酶蛋白变性的物质称做酶的抑制剂(inhibitor)。使酶变性失活(称为酶的钝化)的因素如强酸、强碱等，不属于抑制剂。通常抑制作用分为可逆性抑制和不可逆性抑制两类。 1. 非专一性不可逆抑制 　　抑制剂与酶分子中一类或几类基团作用，不论是必需基团与否，皆可共价结合，由于其中必需基团也被抑制剂结合，从而导致酶的失活。某些重金属(Pb++、Cu++、Hg++)及对氯汞苯甲酸等，能与酶分子的巯基进行不可逆适合，许多以巯基作为必需基团的酶(通称巯基酶)，会因此而遭受抑制，属于此种类型。用二巯基丙醇(british antilewisite,BAL)或二巯基丁二酸钠等含巯基的化合物可使酶复活。 (一)不可逆性抑制作用(irreversible inhibition) 　　不可逆性抑制作用的抑制剂，通常以共价键方式与酶的必需基团进行不可逆结合而使酶丧失活性，按其作用特点，又有专一性及非专一性之分。 2. 专一性不可逆抑制 　　此属抑制剂专一地作用于酶的活性中心或其必需基团，进行共价结合，从而抑制酶的活性。有机磷杀虫剂能专一作用于胆碱酯酶活性中心的丝氨酸残基，使其磷酰化而不可逆抑制酶的活性。当胆碱酯酶被有机磷杀虫剂抑制后，胆碱能神经末稍分泌的乙酰胆碱不能及时分解，过多的乙酰胆碱会导致胆碱能神经过度兴奋的症状。解磷定等药物可与有机磷杀虫剂结合，使酶和有机磷杀虫剂分离而复活。 (二)可逆性抑制(reversible inhibition) 　　抑制剂与酶以非共价键结合，在用透析等物理方法除去抑制剂后，酶的活性能恢复，即抑制剂与酶的结合是可逆的。这类抑制剂大致可分为以下二类。 1.竞争性抑制(competitive inhibition) 　　抑制剂I和底物S对游离酶E的结合有竞争作用，互相排斥，已结合底物的ES复合体，不能再结合I。同样已结合抑制剂的EI复合体，不能再结合S。 抑制剂I在化学结构上与底物S个相似，能与底物S竞争酶E分子活性中心的结合基团，因此，抑制作用大小取决于抑制剂与底物的浓度比，加大底物浓度，可使抑制作用减弱。 *