免疫学检查在传染病中应用.ppt

免疫印迹法测定HIV抗体 结果判定： HIV抗体阳性有下列任何一项阳性即可确认： 1.至少有两条env带（gp41、gp160和gp120）出现。 2.至少有一条env带和p24同时出现。 HIV抗体阴性：无HIV抗体特异带出现 HIV抗体不确定：出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。 免疫印迹法测定HIV抗体 抗原检测：P24抗原 抗体检测：P24和P55的抗体出现最早，随后出现gp120和gp160的抗体。这些被认为是初期感染最稳定的指标。 梅 毒 梅毒属于一种性传播疾病，病原体为梅毒螺旋体。梅毒螺旋体为密螺旋体，在体外不易生存，煮沸、干燥、常用的消毒剂均可致其死亡，但对潮湿、寒冷环境的耐受力较强。对青霉素、四环素、红霉素、庆大霉素均敏感。 梅毒的传播途径 梅毒螺旋体主要通过性接触传染，接吻、手术、哺乳、输血、接触污染物也可被传染。患梅毒的孕妇可通过胎盘感染胎儿，早期可致胎儿流产、早产，晚期感染的成活胎儿可患先天梅毒。 梅毒的临床分期 第一期：硬兴下疳，极易传播感染。 第二期：梅毒疹期，全身皮肤粘膜出现皮疹。 第一、二期称早期梅毒，传染性强、破坏性较小。 第三期：梅毒，即梅毒晚期。病损部位螺旋体少但破坏性大。 梅毒血清学试验 1.非特异性类脂质抗原试验：试验使用的抗原从牛心中提取的心磷脂、胆固醇和纯化的磷脂酰胆碱（卵磷脂）组成，即类脂质抗原，测定患者血清中的反应素(即抗脂质抗体)。用于梅毒的筛查。 方法主要有： 性病研究实验室试验（VDRL） 快速血浆反应素试验(RPR):半定量评价疗效和判断有无再感染。 不加热血清反应素试验(USR) 甲苯胺红不加热血清试验(TRUST) 梅毒血清学试验 2.梅毒螺旋体抗原试验：使用的抗原是梅毒螺旋体的特异成分。 此类试验有多种，如梅毒螺旋体血凝试验(TPHA) 甲苯胺红不加热血清试验(TRUST) 原理：试剂中的心磷脂作为抗原与抗体发生反应，卵磷脂可加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗体的敏感性。这些成分溶于无水乙醇中，再加入水后胆固醇析出形成载体，心磷脂和卵磷脂在水中形成胶体状包裹在其周围，形成胶体颗粒。将此抗原微粒悬浮于甲苯胺红溶液中，加入待测血清，血清中的抗体与之反应后，可出现肉眼可见的凝集块。 甲苯胺红不加热血清试验(TRUST) 结果判定： 阴性：呈粉红色均匀分散沉淀物 阳性：出现粉红色凝集块，根据凝集块大小记录1+~4+ 阳性反应若需定量检测，可将待测血清用生理盐水倍比稀释后，按定性方法进行。 ELISA法测定梅毒螺旋体(TP)抗体 原理：采用双抗原夹心法 将高纯度TP特异抗原包被于微孔板条，待测血清中如存在TP抗体，即可与之结合。再加入酶标记的高纯度TP抗原，在固相上形成TP抗原-抗TP抗体-酶标记TP抗原夹心复合物，待加入酶底物及色原时即产生呈色反应，呈色强度与TP抗体水平成正比。 参考区间：正常人血清TP抗体阴性 密螺旋体颗粒凝集试验(TPPA) 原理：将梅毒螺旋体Nichols株的精制菌体成分包被于明胶颗粒上，此种致敏颗粒与待检样本中的TP抗体结合时可产生凝集反应。 梅毒抗体检测的临床意义 1.TRUST适用于筛查和治疗效果的监测，梅毒螺旋体抗原试验(ELISA、TPPA、金标记免疫层析等)，对潜伏期和晚期梅毒敏感性更高。 2.梅毒的血清学试验阳性，只提示所测标本中有抗类脂抗体或抗TP抗体存在，不能作为患者感染梅毒的绝对依据，阴性结果也不能排除梅毒螺旋体感染，检测结果应结合临床综合分析。 3.最好每次用两种以上方法检测。 临床免疫学检验 免疫学检验的常用技术 免疫学检验的常用技术 免疫比浊技术 生物素与链酶亲和素的应用技术 金标记酶免分析技术 免疫电泳技术 抗体提取纯化技术 放射免疫分析技术 免疫荧光测定技术 酶联免疫吸附试验 化学发光免疫分析技术 免疫印迹技术 流式细胞术 金标记酶免分析技术 金标记免疫分析技术也称免疫胶体金技术，利用硝酸纤维素（NC）膜等为固相载体，使金标记的抗原或抗体与特异配体的反应在膜上进行，建立了快速的金标记免疫渗滤技术和金标记免疫层析技术，并在传染病、心血管病、风湿病、自身免疫病的免疫学检测中广泛应用。 金标记酶免分析技术 原理：将滤金酸（HAuCl4）用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒（胶体金），标记金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）或抗体，用于免疫印迹、免疫渗滤、免疫层析试验。 金标记免疫层析是利用NC膜条状纤维的毛细管作用，是样品在泳动中与金标记物及包被在NC膜上的抗原或抗体结合，出现呈色的阳性信号。 酶免疫技术 酶和酶作用的底物： 1.辣根过氧化物酶（HRP）,常用底物为邻苯二胺(OPD)，四甲基联苯胺(TMB)和ABTS。 2.碱性磷酸酶(AP)，多采用对硝基苯磷酸酯为底物。 3.其他的酶：有葡萄糖氧化酶、β-半