CRISP原理课件.docVIP

CRISPR/Cas9 基因敲除技术 CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats ）是一种由 RNA 指导的 Cas9 核酸酶对靶向基因进行编辑的技术。 CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御 机制。 目前，来自 Streptococcus pyogenes 的 CRISPR-Cas9 系统应用最为广泛。在这一系 统中，crRNA（CRISPR-derived RNA ）通过碱基配对与转录激活 crRNA（trans-activating RNA ， tracrRNA ）退火结合形成双链 RNA 能特异性识别基因组序列 ，Cas9 蛋白（含有两个核酸 酶结构域，可以分别切割 DNA 两条单链。Cas9 首先与 crRNA 及 tracrRNA 结合成复合物， 然后通过 PAM 序列结合并侵入 DNA ，形成 RNA-DNA 复合结构，进而对目的 DNA 双链 进行切割，生成 DNA 双链断裂（double-strand breaks, DSBs）。在基因组编辑过程中， tracrRNA 和 crRNA 可以融合成为 1 条 RNA （sgRNA ）表达同样可以起到靶向剪切的作用。 通过基因工程手段对 crRNA 和tracrRNA 进行改造