微生物菌体量和生长速率的测定.pptVIP

微生物发酵工程实验 中南民族大学工商学院 环境与生物工程实验教学中心 实验一、微生物菌体量和生长速率的测定 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、实验步骤 五、实验结果 六、注意事项 七、思考题 四、实验步骤 四、实验步骤 四、实验步骤 表1、血球计数板测定菌体量 * * 了解测定菌体量的原理，掌握血球计数板法和比浊法测定液态培养过程中菌体量的实验技术。 一、实验目的 菌体量是表征微生物生长状况的一项基本参数。对于发酵过程的监测控制、动力学研究及细胞成分研究，微生物菌体量的测定是十分重要的工作。生物反应过程的终产物可以分为生物体和生物代谢产物两类。对于前者，生物体的测定非常重要，它是产品多少的量度，对于后者，菌体量与代谢产物通常有一定的比例关系。 本实验分别采用血球计数板法和比浊法测定培养过程中菌体量的变化。 二、实验原理 三、实验材料 1.菌种：大肠杆菌。 2.培养基：牛肉膏蛋白胨（牛肉膏3g/L ；蛋白胨10g/L ； 氯化钠5g/L ；pH7.0-7.2）。 （一）培养基灭菌 取50ml三角瓶7只，分别加入配好的液体培养基20ml，灭菌冷却。 （二）种子活化和接种 将大肠杆菌接入培养基，37℃培养活化。取活化后的大肠杆菌分别接入已灭菌冷却的7只三角瓶培养瓶中，每瓶0.2ml，振荡混匀。 （三）培养 将已接种的三角瓶培养液置于振荡培养箱，200r/min，37℃培养，每隔4小时取样，取得的样品0～5℃冷藏待测。 （四）血球计数板法测定菌体量变化 ①血球计数板法：样品计数时每小格5个细胞左右为宜。 ②样品菌液稀释：采用梯度稀释法将保存的样品培养液做10-1～10-7稀释；C.从4号管开始计数。如计数数据范围过大或过小以致无法读数，则取稍大或稍小稀释倍数菌液重新测定。 （五）比浊测定 以未接种的牛肉膏蛋白胨培养基做空白对照，选用540～560nm波长进行光电比浊测定，以最稀浓度的菌悬液开始依次进行测定，对浓度大的，用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，其光密度值在1.00以内，记录OD值。 样品菌液稀释 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 （1）将测得数据填入表1，表2。（2）作图：按照两种方法测定的菌体量对培养时间作图，得到大肠杆菌的生长曲线。（3）将血球计数板法和比浊法测定的菌体量的结果相关联，找出他们之间的关系。 五、实验结果 菌体（个/ml） 稀释倍数 7 6 5 4 3 2 1 样品编号 光密度值OD 稀释倍数 7 6 5 4 3 2 1 样品编号 表2、比浊法测定菌体量