八种动物血清蛋白的聚丙烯I胺凝胶电泳.pdfVIP

遗传学报，1.5(4):290-298,1988 .1cta GeneticaSinica 八种动物血清蛋白的聚丙烯I胺凝胶电泳 和在进化中相互的关系 丫 } I- 工 不 ‘卜 （中国科学院动物研究所，北京） 贾 凤 兰 （中国预防医学科学院病毒研究所，北京） 本文利用聚丙ft胺凝胶电泳方法分析了隶属两个纲6个目的8种动物血清蛋白。它们是 两栖纲的青蛙、大A-,Q;哺乳纲的树助、长爪沙鼠、穿山甲、豹猫猪和果子狸。 在分析了科以下分类阶元各种动物血清蛋白组成及进化的基础上，我们比较了这8种亲 缘关系较远并在分类上隶属于各不同高级分类阶元之间的关系。 分析结果表明，在纲与纲、目与目之间，动物血清蛋白中特有蛋白的比例数，随起源时间由 远到近，有增大的趋势；而在科与科之间则相反。共有蛋白区带的比例随着分析范围的扩大而 逐渐变小。 这些结果为纲、目及科的分类学的宏观定义提供了分子水平上可以参考的实验依据。 关键词：8种动物，血清蛋白，SDS 近年来，利用各种电泳研究野生动物、家畜的蛋白质已有报道。但是，大多是在亲缘 关系很近的物种间进行的i,〔iaa97。 我们曾分析鹿科动物属、种及亚种的血清蛋白生化电 泳）。‘现将8种亲缘关系较远的动物血清蛋白进行了聚丙烯酸胺凝胶电泳，并且尝试在高 分类阶元上探讨这些蛋白质在进化中相互的关系。 材 料 和 方 法 一（）动物血清 8种动物的血清，均系从野外捕捉的个体的静脉抽取获得。 一30℃低温保存。 这些动物是：青蛙 (Rananigromaculata)隶属两栖纲无尾目；大鱿 (Megalobatr- achusdividianus)隶属两栖纲有尾目；树鲍 (Tupaiabelangar)隶属哺乳纲灵长目；长 爪沙鼠 (Merionesunguiculatus)隶属哺乳纲啮齿 目；格 (Nyctercutesprocyonoides) 隶属哺乳纲食肉目犬科；果子狸 (Pagumalarvata)隶属哺乳纲食肉目灵猫科；豹猫 (Feltsbengalensis)隶属哺乳纲食肉目猫科；穿山甲 M（antspentadactyla)隶属哺乳纲 鳞 甲目。 1984年将这些血清进行了聚丙烯酞胺凝胶电泳分析2)O 本文于 1987年3月2日收到。 1)鹿科动物血清的等电聚焦电泳、聚丙烯酞胺凝胶电泳分析等二篇文章，拟在“兽类学报”1988年第1期发表。 2）在美国德州达拉斯市Wadley分子医学研究所遗传室进行分析。 斗期 王宗仁等：八种动物血清蛋白的聚丙烯酚胺凝胶电泳和在进化中相互的关系 x.91 二（）聚丙烯酞胺凝胶电泳 S（DS） 电泳仪和电泳槽都是Pharmacia公 司 瑞（典）出品。 标准蛋白质 M（arker)(CalibrationKitsformolecalarWeightdetermination usingelectrophoresis),购自pharmacia公司。 主要试剂：丙烯酸胺、Bis一甲叉双丙烯酸胺、十二烷基硫酸钠 （SDS)、四甲基乙二 胺 (TEMED）和过硫酸按均购自Sigma公司。 三（）方法 按 Pharmacia公司于德州达拉斯市举办的电泳技术学习班的方 法[12,14,21]。采用12.5界的分离胶，3并的样品胶。样品加在样品胶中，电压为80V，当样品 泳动30分钟到分离胶时电压为150180V，泳动3.5-4小时。泳动完毕，用20多三氯乙 酸固定30--60分钟。用0.115外的考马斯亮蓝 R25。染色，室温过夜。用酒精、冰醋酸脱 色，直至析出蛋白区带。 （四）分子量的测定 参照文献[151o 蛋白从原位移动的距离 计算出Rf值：Rf＝