原料乳中金黄色葡萄球菌环介导等温扩增LAMP检测.pdf

江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆ Ａｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０１７ꎬ３３(５):１１７１~１１７５ ｈｔｔｐ:/ / ｗｗｗ.ｊｓｎｙｘｂ.ｃｏｍ １１７１ 李晓霞ꎬ贾　 淼ꎬ金君华ꎬ等. 原料乳中金黄色葡萄球菌环介导等温扩增(ＬＡＭＰ)检测方法的建立及应用[Ｊ].江苏农业学报ꎬ ２０１７ꎬ３３(５):１１７１￣１１７５. ｄｏｉ:１０.３９６９/ ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０１７.０５.０３２ 原料乳中金黄色葡萄球菌环介导等温扩增(ＬＡＭＰ) 检测方法的建立及应用 李晓霞ꎬ　 贾　 淼ꎬ　 金君华ꎬ　 张红星ꎬ　 刘　 慧ꎬ　 谢远红 (北京农学院食品科学与工程学院ꎬ农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室/ 食品质量与安全北京实验 室ꎬ北京 １０２２０６) 　 　 摘要:　 为了建立原料乳中金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增(ＬＡＭＰ)检测方法ꎬ本研究根据金黄色葡萄球菌 的耐热核酸酶基因(ｎｕｃ)在保守区域设计特异性引物ꎬ建立ＬＡＭＰ检测方法ꎬ并用于原料乳中金黄色葡萄球菌的快 速检测ꎮ 结果表明ꎬ针对金黄色葡萄球菌的基因组ＤＮＡꎬ使用设计合成的４条引物和建立的ＬＡＭＰ 方法能够有效 检测金黄色葡萄球菌ＤＮＡꎬ每２５０ μｌ反应体系的灵敏度为１１００ ｆｇꎬ并且此方法针对金黄色葡萄球菌具有良好的 特异性ꎮ 针对原料乳中金黄色葡萄球菌的污染ꎬ建立的ＬＡＭＰ 检测方法的检测限为６７ ＣＦＵ/ ｍｌꎮ 本研究结果为进 一步将ＬＡＭＰ方法应用于食品中金黄色葡萄球菌的安全检测奠定了基础ꎮ 关键词:　 环介导等温扩增(ＬＡＭＰ)ꎻ 金黄色葡萄球菌ꎻ 耐热核酸酶基因(ｎｕｃ)ꎻ 灵敏度ꎻ 特异性 中图分类号:　 ＴＳ２０７.４　 　 　 文献标识码:　 Ａ　 　 　 文章编号:　 １０００￣４４４０(２０１７)０４￣１１７１￣０５ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｏｐ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ (ＬＡＭＰ) ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｉｎ ｒａｗ ｍｉｌｋ ＬＩ Ｘｉａｏ￣ｘｉａꎬ　 ＪＩＡ Ｍｉａｏꎬ　 ＪＩＮＪｕｎ￣ｈｕａꎬ　 ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ￣ｘｉｎｇꎬ　 ＬＩＵ Ｈｕｉꎬ　 ＸＩＥ Ｙｕａｎ￣ｈｏｎｇ (Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬＢｅｉｊｉｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ/ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｓｐｏｉｌａｇｅ Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄＰｅｓｔｉ￣ ｃｉｄｅＲｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ/ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ＳａｆｅｔｙꎬＢｅｉｊｉｎｇ １０２２０６ꎬＣｈｉｎａ) 　 　 Ａｂｓｔｒａｃｔ:　 Ｔｈｅ ｌｏｏｐ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ(ＬＡＭＰ)ｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａｎｄ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎｔｈｅｒａｐｉｄ ｄｅ￣ ｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｉｎ ｒａｗ ｍｉｌｋ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅａｔ￣ｔｏｌｅｒａｎｔ ｎｕｃｌｅａｓｅ ｇｅｎｅ(ｎｕｃ). Ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｏｆ Ｓ. ａｕｒｅｕｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅｆｏｕｒ ｐｒｉｍｅｒｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄꎬａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｗａｓ １１００ ｆｇ ｐｅｒ２５０ μｌｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ.ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓＳ. ａｕｒｅｕｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃꎬｗｉｔｈｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｏｆ６７ＣＦＵ/ ｍｌｉｎｒａｗ ｍｉｌｋ. Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ａ ｂａｓｉｓｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＬＡＭＰ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓ.ａｕｒｅｕｓ ｉｎ ｆｏｏｄ.