基因工程及其应用(公开课)演示课件.pptVIP

作为运载体必须具备哪些条件？ 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 1、细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子； 2、质粒的存在对宿主细胞无影响； 3、质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 质粒可作为有何特点？ 二、基因操作的工具 。 从细胞中分离出DNA 从大肠杆菌中提取质粒 提取目的基因 限制酶 目的基因与运载体结合 DNA连接酶 目的基因导入受体细胞 目的基因的表达与检测 三、基因操作的基本步骤 。 三、基因操作的基本步骤 。 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 三、基因操作的基本步骤 。 目的基因的提取方法 直接分离基因： 人工合成基因： 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA 鸟枪法 三、基因操作的基本步骤 。 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离基因——鸟枪法 　　将供体细胞中的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到不同的受体细胞中去，让这些DNA片段在受体细胞中扩增。从中找出含有目的基因细胞，并将含有目的基因的DNA片段分离出来。　　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大。一般不适用于真核细胞的基因。 三、基因操作的基本步骤 。