基因工程报告.pptVIP

* * A B C D Tester杂交液（Adaptor 1） A B C D Tester杂交液（Adaptor 2R） Driver cDNA （加热变性） A, B, C, D E 第二次消减杂交 实验流程 * * A, B, C, D 末端补齐 E A B C D E E 末端补齐 实验流程 * * A B C D E 加入共用PCR引物 E A, D: 不能被扩增 C: 线性扩增 B: 扩增受到抑制 E 5’ 3’ 3’ 5’ E 第一次PCR扩增 实验流程 * * 非特异性表达基因得到极大的扣除， 高效地富集了差异表达基因。 E 5’ 3’ 3’ 5’ 加入巢式PCR引物 E 第二次PCR扩增 实验流程 * 实验过程要点分析 * 琼脂糖凝胶电泳检测，RNA有两条明显的带28 S和18 S，亮度在2 : 1左右。 * 实验过程要点分析 * * 实验过程要点分析 * 1和3的亮度会低于2和4的亮度，但是亮度不能过低。 * 抑制性消减杂交结果分析 * 消减杂交效率分析 基因得到了极大的扣除 * 后续实验流程 * 纯化二轮PCR产物（cDNA消减库） T/A克隆，特异位点或平末端克隆到相关载体中，转化大肠杆菌 蓝白斑筛选和琼脂糖凝胶电泳检测 初步筛选出阳性重组克隆 测序后获得EST序列 BLAST