实验α淀粉酶固定化及淀粉水解作用检测.pptVIP

实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 学前思考： 1、蛋白质初步水解，彻底水解，氧化分解的产物分别是什么？ 2、淀粉在α-淀粉酶催化下初步水解的产物？写出淀粉逐步水解的酶和相关产物。 淀粉 糊精 麦芽糖 葡萄糖 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色 α-淀粉酶 β-淀粉酶 糖化淀粉酶 3、实验室导师让某同学通过淀粉和α-淀粉酶溶液，每天制备一些纯净的糊精，会遇到什么问题？ 一、基础知识 固定化酶：是将酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 优点：固定化酶固定在一定的空间范围内，可以重复使用，且能及时与产物分离。 酶固定化的常用方法 吸附法 (1)物理吸附法 (2)离子交换法 包埋法 将酶蛋白包埋在凝胶交联后的“格子”中。 交联法 酶蛋白的氨基以戊二醛与载体相连。 共价偶联法 酶蛋白的一些基团与载体共价结合。 1. 吸附法 (1)物理吸附法：将酶蛋白分子吸附在惰性载体上。惰性载体指对蛋白质有高度吸附能力的活性炭、石英砂等。 (2)离子交换法：酶蛋白带有电荷的基团与离子交换剂形成离子键。 二、实验内容 1、用吸附法将α-淀粉酶固定在石英砂上。 三、设备及用品 塑料注射器、烧杯、滴管、自行车用气门心和夹子、注射器架、试管或微量离心管等。 四、实验材料 1、 α-淀粉酶，石英砂， 2、可溶性淀粉溶液 3、5mmol/LKI-I2溶液 五、实验原理 一定浓度的淀粉溶液经过固定酶柱后，可使淀粉水解成糊精。用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色，表明水解产物糊精生成。 淀粉 糊精 麦芽糖 葡萄糖 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色 α-淀粉酶 β-淀粉酶 糖化淀粉酶 六、实验步骤 5mg α-淀粉酶+4mL蒸馏水+5g石英砂（搅拌30min） 装入下端接有气门心并用夹子封住的注射器中 10倍体积蒸馏水洗涤注射器以除去未吸附的淀粉酶，流速1mL/min 用滴管滴加淀粉溶液，以0.3mL/min流速过柱 流出5mL溶液后接收0.5mL流出液，加1~2滴过柱KI-I2溶液，观察颜色 10倍体积蒸馏水洗涤注射器4℃保存 为什么要控制流速？ 淀粉溶液 吸附有α-淀粉酶的石英砂 1 2 3 4 1、2mL水+1~2滴KI-I2溶液 、2mL淀粉液+1~2滴KI-I2溶液 、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液 、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液+稀释1倍 七、实验结果 2.冰箱保存后的固定化酶柱，重复实验，是否有相同结果？ 1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶？ 八、问题讨论 将洗涤流出液滴加到一定量的可溶性淀粉溶液中，用手握住试管增加温度，几分钟后滴加碘液，如果仍显蓝色，说明通过洗涤已经除去未吸附的游离淀粉酶，洗涤目的达成 酶促反应的温度、pH等条件与之前不同， 或蒸馏水洗涤时流速过快导致酶数量过少等。