FastFire快速荧光定量PCR预混试剂(Probe)(FP208).PDF

FastFire快速荧光定量PCR预混 试剂(Probe)(FP208) 操作指南 天根生化科技（北京）有限公司 版本号 实验准备 1. cDNA 样本 2. 移液器及配套枪头（RNase-free ） 3. 1.5 ml 离心管（RNase-free ），200 μl PCR管（RNase-free ） 4. 涡旋振荡器，台式离心机，金属浴/ PCR仪 Step 1 融解2 ×FastFire qPCR PreMix，50 ×ROX Reference Dye，cDNA模板，引物，探针和RNase- Free ddH O，并将所有试剂在室温下平衡并彻底混匀，之后置于冰上。 2 使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。 Step 2 建议在冰上按下表进行Real Time PCR反应液的配制 组成成分 50 μl 体系 25 μl 体系 20 μl 体系 终浓度 2 ×FastFire 25 μl 12.5 μl 10 μl 1× qPCR PreMix 正向引物(10 μM) 1.5 μl 0.75 μl 0.6 μl 0.3 μM 反向引物(10 μM) 1.5 μl 0.75 μl 0.6 μl 0.3 μM 荧光探针(10 μM) 1.0 μl 0.5 μl 0.4 μl 0.2 μM cDNA模板 － － － － 50 ×ROX － － － － Reference Dye RNase-free 至50 μl 至25 μl 至20 μl － ddH O 2 Tips 1. 配制定量混合液时，应首先确定所需的反应数量，然后在反应数量的基础上增加10%-20% ，计算体系 配制数量。例如，一共需要做5个定量反应时，则体系配制数量至少为6 ；一共需要做10个定量反应时， 则体系配制数量至少为11；一共需要做20个定量反应时，体系配制数量至少为22 。以此类推。 2. 按配制数量，先计算除cDNA模板和水之外的组分所需的用量，在冰上将所有组分共同配制到同一管中 制成混合物，彻底混匀，短暂离心。 3. 计算每个样本所需加入的cDNA模板的体积和所需补充的ddH O的体积。如果每个样本所需的ddH O体 2 2 积都相同，可计算总体所需的ddH O体积并加入到混合物中，彻底混匀。 2 1个20 μl体系 6个20 μl体系 11个20 μl体系 22个20 μl体系 试剂 使用量 使用量 使用量