DNA的粗提取与鉴定复习课件新-精选课件(公开).pptVIP

* 选修I 专题5 DNA的粗提取与鉴定 DNA 的 粗 提 取 与 鉴 定 DNA的特性 DNA的溶解性 DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 DNA的显色反应 DNA的粗提取 提取、提纯、鉴定原理 选材 步骤 DNA的提纯 DNA的析出与鉴定 重要药品与试剂： DNA 的 粗 提 取 与 鉴 定 DNA 的 特 性 DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 DNA 的 粗 提 取 与 鉴 定 DNA 的 特 性 1、DNA的溶解性 2、DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 4、DNA的显色反应 DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂 DNA 的 粗 提 取 与 鉴 定 DNA的特性 DNA 的 粗 提 取 提取原理 选材 ② DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 ③ DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 ④ DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 ①细胞释放DNA的原理：低渗溶液或用洗涤剂和食盐瓦解细胞膜 凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大 动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可 1、动物细胞 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 2、植物细胞 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解 ②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 DNA 的 粗 提 取 与 鉴 定 DNA的粗提取 提取原理 选材 步骤 DNA的提纯 DNA的鉴定 重要药品与试剂： 体积分数为95%的冷酒精溶液、蒸馏水、质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸纳溶液、质量的浓度分别为2mol/L 二苯胺试剂。 破碎细胞，获取含DNA的滤液 实验材料的选取 去除滤液中的杂质 DNA的析出与鉴定 DNA 的 粗 提 取 与 鉴 定 DNA的特性 DNA的粗提取 DNA 的 提 纯 提取到DNA可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 杂质 提纯方法 1、利用不同浓度的氯化钠溶液反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 2、利用蛋白酶分解杂质蛋白 3、利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离 DNA的析出与鉴定 4、 DNA的析出与鉴定 DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95 ％） ，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水 1、DNA的析出 2、 DNA的鉴定 鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色 关于DNA粗提取的实验材料的选择，研究者经过多次实验效果的比较，最终选择鸡血做实验材料。请据图回答问题： (1)鸡血细胞中红细胞_____________，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中____细胞数目较多，可以提供丰富的_________。 (2)实验前由老师制备血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因________________________。 (3)生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，若它们按实验要求完成实验步骤后，结果是_____________,这是因为这