Mx1PK15对伪狂犬病病毒的抑制.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（３）：１７ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 研究报告檪 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪 猪Ｍｘ１和牛Ｍｘ１蛋白在ＰＫ１５细胞中的表达及其 对伪狂犬病病毒的抑制 王　鹏　郑兆鑫　刘明秋 （复旦大学生命科学学院　上海工业菌株工程技术研究中心　上海　２００４３３） 摘要　目的：研究猪Ｍｘ１和牛 Ｍｘ１蛋白在 ＰＫ１５细胞中的表达并检测其是否对伪狂犬病病毒 （ＰＲＶ）具有抑制作用。方法：从ＩＢＲＳ２细胞和ＭＤＢＫ细胞中分别调取猪Ｍｘ１和牛Ｍｘ１基因，并 克隆到ｐｃＤＮＡ３．１／ｍｙｃＨｉｓ（）Ｂ，构建得到真核重组表达质粒，以脂质体转染的方法将其分别导 入到ＰＫ１５细胞，从ｍＲＮＡ水平和蛋白质水平鉴定重组质粒在细胞内的表达情况，然后用细胞毒 性试剂盒检测这两种蛋白是否对ＰＫ１５细胞具有毒性。之后，通过荧光定量ＰＣＲ检测猪Ｍｘ１和 牛Ｍｘ１在攻毒后不同时间、不同攻毒剂量的条件下对ＰＲＶ的抑制情况，并观察１００ＴＣＩＤ 病毒攻 ５０ 击细胞７２ｈ后的病变程度。结果：成功克隆了猪Ｍｘ１和牛Ｍｘ１基因，经ｍＲＮＡ水平和蛋白质水 平证实，两种重组质粒在ＰＫ１５细胞内能够正常表达。从荧光定量ＰＣＲ和细胞病变的角度来看， 细胞内表达的Ｍｘ１蛋白对ＰＲＶ具有显著性的抑制（Ｐ＜０．００１）。结论：猪Ｍｘ１和牛Ｍｘ１基因在 ＰＫ１５细胞中表达的Ｍｘ１蛋白能够抑制ＰＲＶ在胞内的复制。 关键词　猪Ｍｘ１　牛Ｍｘ１　ＰＫ１５细胞　伪狂犬病病毒 中图分类号　Ｑ８１２ 　　伪狂犬病病毒（ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）属于疱疹 下游基因之一，其编码的是一种鸟苷三磷酸酶，属于动 ［４］ 病毒科，甲型疱疹病毒亚科，水痘病毒属。病毒基因组 态超家族成员 。在不同的真核细胞中Ｍｘ基因亚型 ［５］ ［６］ 为线状双链 ＤＮＡ，长度约为１４３ｋｂ，至少包含７２个基 不同，如鱼Ｍｘ１、Ｍｘ２、Ｍｘ３ ，人类ＭｘＡ、ＭｘＢ ，小鼠 因。此病毒的ＤＮＡ是由２０面体的衣壳包裹，形成核衣 ［７］ Ｍｘ１、Ｍｘ２ ，等。Ｍｘ蛋白可在多种动物细胞内表达， ［１］ 对多种病毒的复制具有一定的抑制作用，表明该蛋白 壳 。这种病毒可以引起新生猪脑炎、成长发育中的 猪呼吸紊乱、繁殖失败等，因此造成巨大的经济损失。 质在抗病毒药物研发方面具有潜在的应用价值。目 在中国过去几十年中，通过使用活疫苗有效地控制了 前，国内外关于 Ｍｘ抗病毒研究以ＲＮＡ病毒居多，抗 ［８］ 这种疾病并降低了经济损失。但是２０１２年，在很多免 ＤＮＡ病毒的较少 ，因此，本工作希望通过研究猪 Ｍｘ 疫过这种基因缺失疫苗的猪场却暴发了ＰＲＶ，尤其在 和牛Ｍｘ两种蛋白在猪ＰＫ１５细胞中对ＰＲＶ的抗病毒 ［２３］ 能力，为今后在动物体内应用 Ｍｘ蛋白抗 ＰＲＶ等 ＤＮＡ 河南及周边城市 。因此，非常有必要找到新的方法 控制这种疾病。 病毒研究奠定基础。 　　Ｍｘ基