小鼠骨髓细胞染色体畸变实验.pptVIP

实验四 小鼠骨髓细胞染色体畸变实验 * 一、实验目的 1.学习骨髓细胞制片技术 2.学习和掌握骨髓细胞染色体畸变测定方法 * 二、实验原理 同微核 微核在有丝分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质 染色体畸变只能在细胞分裂中期相进行观察 * * * 三、实验步骤 1.染毒：CP腹腔注射（100mg/kg）一次 2.细胞周期同步化：处死前2-3小时腹腔注射秋水仙碱 400mg/L，4mg/kg 3.取样：双侧股骨→PBS（pH6.8）5ml冲洗骨髓腔→离心 1500rpm/min→弃上清 * 4.低渗：0.075M KCl6ml,37°c孵育15分钟→加入固定液1ml预固定1分钟→离心1000rpm/min十分钟，弃上清 5.固定：固定液4ml，37°c孵育20分钟→离心十分钟（1000rpm/min），弃上清。重复一次步骤5. 6.制片：试管内余下约0.5ml，冰冻玻片滴片，干燥。 7.染色：Giemsa染液染色3分钟。 8.阅片：油镜下计数100个中期相细胞，畸变细胞率 * 四.注意事项 1.骨骺端 2.滴片：距玻片5-8cm。过低染色体分散不开，过高细胞破裂 3.低渗：时间过长染色体短胖，不清楚；时间过短染色体不分开。 * Thank You for Your Attention