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读书报告 n 报告人：胡俊仪 n 时间：2019年1月6日 高糖诱导团头鲂的氧化应激通过PI3K/Akt/Nrf2通路中的调控机制 目 录 CONTENTS 01 前言背景 02 研究方法 03 结果与讨论 01 前言背景 • PART ONE 背景 在商品饲料配方中，糖类作为成本最低的能源被广泛运用。饲料中 添加糖可以减少蛋白质的消耗，减少氨氮对水污染的负荷。饲料中适当 水平的糖对蛋白质或脂类的利用起着至关重要的作用。然而，鱼饲料中 高水平的糖会导致鱼类氧化应激，抑制生理活动，降低肝脏抗氧化能力， 引起免疫损伤。 • PART ONE 背景 目的与意义： 团头鲂，因其具有极高的经济效益、优良的肉质、快速的生长性能和较 高的幼苗存活率，是我国主要的淡水养殖鱼种。以往的研究主要集中在不同 浓度CHO喂养下鱼的生长性能(增重) 、抗病性、饲料利用率、消化酶和身体 组成等方面。还没有关于高糖摄入对团头鲂氧化应激和免疫功能损害的分子 机制的研究。因此，本研究旨在探讨口服高浓度葡萄糖对团头鲂呼吸暴发、 抗氧化状态和肝血红素氧合酶-1 (ho1)和PI3K/Akt/ nrf2相关信号分子基因表 达的影响，为高糖诱导的肝脏损伤和氧化应激提供理论依据。 • PART ONE 背景 呼吸爆发又称为氧爆发，是指活性氧(ROS) 的快速释放，如超氧阴离子 (O 、过氧化氢(H O ) 、羟基自由基(OH) ，来自免疫细胞如中性粒细胞和单核细 2) 2 2 胞;它在免疫系统中起着重要的作用。在营养物质包括糖代谢过程中，会产生大 量ROS。 天然免疫中，病原微生物被吞噬后，免疫细胞的一种氧依赖的杀伤机制。 NADPH氧化酶：NADPH+2O2生成NADP+2O-2+H+ 2O-2+2H+生成H2O2+ O-2 H2 O2 + Cl- 生成OCl- + H2O生成 ‘O2+ Cl- + H2O生成H2O2 + ‘O2 其中的Cl-和OCl- 都具有毒性，可以杀伤吞噬入细胞的病原体。 杀伤以后，要把过氧化物还原，需要过氧化物酶体。 在超氧化物歧化酶的作用下，还原成H2O + O2 。 02 研究方法 • PART TWO 研究方法 鱼与实验设计 为探讨高糖诱导下团头鲂氧化应激的分子机制 ，进行了为期3天的 高糖负荷实验。 团头鲂 （19.94 ±0.58 g）在实验室条件下(光周期为自然条件 ，整 个实验期间水温维持在25~26℃) ，在实验设施的室内水箱(每个300 L) 中驯化2周 ，实验前用基础商业饲料喂养。团头鲂禁食24小时后 口服3 g/ kg(体重)葡萄糖。口服前随机采集9条鱼作为对照。 • PART TWO 研究方法 样品收集 在灌喂后的0、1、2、4、8、12、24、48 h各时间点随机抽取3 条鱼进行取样。从尾静脉采集血样 ，分为3个管 ，分别进行血液呼吸 暴发测量、血细胞数和血浆制备。将血液以7500rpm，4c离心5分钟 制备血浆 ，血浆在-80℃保存 ，以备后续血浆参数分析。收集肝脏 ， 立即冷冻在液氮中，保存在-80℃ ，以便随后检测基因表达和酶活性。 血液生化指标：采用检测试剂盒检测血浆中甘油三酯(TG)、白蛋白(ALB)、 总蛋白(TP)、碱性磷酸酶(ALP)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶 (ALT)水平。 细胞计数：白细胞数、红细胞数和血红蛋白含量采用自动血液学分析仪 (BC- 5300Vet;深圳迈瑞医疗国际有限公司)及检测试剂盒(深圳迈瑞医疗国 际有限公司)。 呼吸爆发活力：100毫升血浆和0.2%的硝基蓝四唑 （NBT ）溶液在25℃的黑 暗中孵育30min。孵育后，15 mL反应溶液和300 mL