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利用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达人白蛋白基因 的中国仓鼠卵巢细胞系 1 2 2 2* 1* 周松涛 陈蕴 龚笑海 金坚 李华钟 (1. 江南大学生物工程学院 江苏 无锡 214122；2. 江南大学药学院 江苏 无锡 214122) (2. 摘要：通过目的基因的随机整合方式，构建得到的CHO表达细胞系，常会因为目的基因插入到染色体内不 稳定区域，而在长期传代过程中出现表达不稳定的现象，这主要是由于位点效应所导致。为了解决这个问 题，现利用CRISPR/Cas9技术介导的同源重组，将目的基因直接整合于CHO细胞染色体上稳定表达区域， 以克服位点效应带来的CHO表达细胞系的长期表达不稳定。现总共利用该技术获得了2株外源基因 （人白蛋 白基因）定点整合细胞系；western blot结果显示，细胞上清液的产物具有人白蛋白抗原性；细胞在贴壁 状态下，两株细胞系在第3、12、2