2010-第13章基因表达调控.pptVIP

第13章 基因表达调控 Regulation of Gene Expression 内 容 一、基本概念 内 容 一、基本概念 内 容 一、基本概念 乳糖操纵子 没有乳糖存在时，不能合成分解乳糖的三种酶； 有乳糖存在时，诱导合成分解乳糖的三种酶，利用乳糖。 可诱导的负调控。 色氨酸操纵子 负责色氨酸的生物合成 色氨酸的合成分5步完成。每个环节需要一种酶，编码这5种酶的基因紧密连锁在一起。 当培养基中缺乏色氨酸时，操纵子被打开，5个基因表达，合成色氨酸；有足够的色氨酸时，这个操纵子自动关闭。 内 容 一、基本概念 基因表达过程动画 研究DNA与蛋白质结合（electrophoretic?mobility?shift?assays，EMSA）凝胶迁移滞后实验 蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合，电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢，即表现为相对滞后。用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白，并可通过加入特异性的抗体 （supershift）来检测特定的蛋白质，并可进行未知蛋白的鉴定。 JAK-STAT通路转导白细胞介素受体信号 miRNA生命周期 siRNA工作机理 二、基本原理 三、原核表达调控 四、真核表达调控 一、真核基因组特点 （一）真核基因组大 哺乳类动物基因组DNA 约 3×109碱基对。 人编码基因约2-3万个，编码序列仅占总长的1%。 rDNA等重复基因约占5%~10%。 （二）单顺反子 （三）真核基因组含有大量的重复序列 高度重复序列（106 次） 中度重复序列（103 ~ 104次） 多拷贝序列 （四）不连续性（内含子） 二、真核基因表达调控更为复杂 （一）含有三种RNA聚合酶（I，II， III） Gene activation （二）染色体水平 活化基因对核酸酶敏感 DNA拓扑结构变化 DNA的甲基化与基因表达程度呈反比 组蛋白变化 （三）在真核基因表达调控中以正性调节占主导 （四）在真核细胞中转录与翻译分隔进行 （五）转录后修饰、加工更为复杂 （一）DNA（顺式作用元件） 启动子 四、RNA Pol II转录调节 CCAAT盒 GC盒 TATA盒 转录起始点 高等真核生物 上游激活序 列（UAS） TATA盒 转录起始点 酵母 增强子(enhancer) （二）蛋白质（反式作用因子） 分类 顺式作用元件 基本转录因子 转录激活因子 转录抑制因子 基本转录因子 转录激活因子 转录抑制因子 NF-?B是重要的炎症和应激反应信号分子 转录调节因子结构 DNA结合域 转录激活域 （二聚化结构域） 转录激活域 转录后调节 （一）hnRNA加工成熟的调节 （二）mRNA运输、胞浆内稳定性的调节 加工过程包括加帽、加尾、剪接、碱基修饰和编辑等。 通过与蛋白质结合形成核蛋白体复合物(ribonucleoprotein, RNP)进行。 七、翻译水平以及翻译后 （一）磷酸化调节翻译起始因子（eukaryotic initiation factor, eIF）,调节起始阶段 ------Gingras et al, 1999 （二）RNA结合蛋白调节翻译 （RNA binding protein, RBP） 转录终止、RNA剪接、RNA转运、RNA胞浆内稳定性控制以及翻译起始等。 （三）蛋白质浓度、活性的调节 蛋白质的半衰期： 蛋白质的修饰：磷酸化、甲基化、酰基化修饰，可以达到调节蛋白质功能的作用 非编码单链RNA，长度约20~25nt。由一段具有发夹环结构，长度为70~90个碱基的单链RNA 前体(pre-miRNA)经Dicer酶剪切后形成。 （四）小分子RNA的调节 1．微小RNA (microRNA, miRNA) 一般为20~25nt； 不同生物普遍存在； 序列有一定的保守性； 表达有时间特异性、空间特异性； 多位于基因间隔区。 miRNA的特点： 双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)在特定情况下通过一定酶切机制，转变为具有特定长度(21~23nt)和特定序列的小片段RNA。 与特异的靶mRNA完全互补结合，导致靶mRNA降解，阻断翻译过程。 由siRNA介导的基因表达抑制作用被称为RNA干涉(RNA interference，RNAi)。 2．小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA) 30bp 双链RNA（dsRNA） 水解生成 21-23nt siRNA 5’ 3’ 3’ 5’ RISC形成 识别特异序列 并使其降解 RNA干扰作用机制 * 目录 诱导的全能干细胞（iPS）--2007年 The researc