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(5)T4感染后的挽救 并罐法 更换菌种:轮换菌株、抗性菌株 放罐重消,补料,接种 罐内灭菌 染菌的善后 培养基必须灭菌后才可放下水道。 灭菌方法:蒸汽灭菌,也可加入过氧乙酸等化学灭菌剂搅拌半小时,才放下水道。 找到染菌的原因,对症下药,彻底清洗消毒。 染菌厉害时,车间环境要用石灰消毒,空气用甲醛熏蒸。特别,若染噬菌体,空气必须用甲醛蒸汽消毒。 小 结 染菌对发酵的危害: 干扰生产菌的正常代谢,降低产量 改变pH,降解某些产物 污染不同的微生物,不同阶段染菌危害 染菌对提炼的危害: 沉淀出过多杂质 过滤困难而大幅度降低过滤收率 有机溶剂萃取时发生乳化 设备渗漏 空气带菌 种子带菌 灭菌不彻底 技术管理不善 发酵液必须灭菌后才可放下水道 寻找染菌的原因 染菌厉害时,车间环境要用石灰消毒 产生噬菌体的原因 活菌体随意排放,造成噬菌体的感染源 噬菌体的防治 危害:造成断种,无法生产 建立工厂环境清洁卫生制度 感染噬菌体的培养物不得带入菌种室、摇瓶间 发现噬菌体停搅拌、小通风,将发酵液加热到70~80℃杀死噬菌体,才可排放。 环境用漂白粉消毒 选育抗噬菌体的菌种 思考题 染菌对发酵有什么危害,对提炼有什么危害? 有哪些原因会引起染菌? 染菌以后应采取什么措施? 为什么会感染噬菌体?感染了噬菌体后应采取哪些措施? 放线菌发酵:5只大罐,其中两只连续染菌、并且是同样的杂菌(细菌),另外三只正常。请分析可能的原因? End ?#? 2 众所周知,微生物广泛存在于自然界。而大多数工业发酵都要保持纯种培养状态,这就需要有一套能够适用于工业生产的灭菌技术和防止染菌的技术。许多工业发酵过程染菌后均能影响其生产经济效益,(尤其是抗生素发酵中的染菌,能够严重地威胁抗生素的生产。工业发酵中的染菌不仅可造成巨大的经济损失),扰乱生产秩序、破坏生产计划;还影响后工序的正常生产、影响产品外观及内在质量、增加三废处理难度,进而影响环境保护等危害。 近半个世纪以来,随着抗生素工业发酵技术的不断发展,逐渐形成了一整套保持纯种培养的灭菌和染菌防治技术。国内很多发酵工厂,特别是抗生素生产工厂,由于掌握了灭菌和制服发酵染菌的技术,使发酵染菌率达到了比较先进的水平。根据这些工厂的成功经验,其关键是在染菌的表象中,寻找造成染菌的错综复杂的原因,进而不断地提出解决和防治的措施使发酵染菌率不断降低。 尽管造成工业微生物发酵染菌的原因错综复杂,但大多数原因是可以通过仔细观察现场和认真分析找到的。本章阐述的是一些已被人们所认识和掌握的有关染菌防治和灭菌的基本理论和技术。 ?#? 5 ?#? 6 1.发酵产物是某一种微生物或几种微生物在培养基中培养时产生的,如果在发酵时夹杂有其他微生物,可引起下列的后果: (1)产生菌和杂菌同时在培养基中生长,结果使生产菌丧失了生产能力;杂菌的生长速度有时会比产生菌生长得更快,结果使发酵器中以杂菌为主了(尤其是在连续发酵过程中) (2) 杂菌会污染最终产品,如生产单细胞蛋白质时,从发酵液中分离出的细胞夹杂有杂菌; (3)杂菌本身和其所产生的物质,都可以使产物提取难度加大; (4)杂菌降解所需要的产物。如抗生素发酵时,污染细菌,有些细菌对抗生素有抗性,常见的抗性机制是降解抗生素。如能产生β-内酰胺酶的细菌能降解β-内酰胺类抗生素。 (5)发酵时如污染嗜菌体,可使产生菌发生溶菌现象。 染菌的危害因不同发酵而不同 ?#? 7 1.发酵产物是某一种微生物或几种微生物在培养基中培养时产生的,如果在发酵时夹杂有其他微生物,可引起下列的后果: (1)产生菌和杂菌同时在培养基中生长,结果使生产菌丧失了生产能力;杂菌的生长速度有时会比产生菌生长得更快,结果使发酵器中以杂菌为主了(尤其是在连续发酵过程中) (2) 杂菌会污染最终产品,如生产单细胞蛋白质时,从发酵液中分离出的细胞夹杂有杂菌; (3)杂菌本身和其所产生的物质,都可以使产物提取难度加大; (4)杂菌降解所需要的产物。如抗生素发酵时,污染细菌,有些细菌对抗生素有抗性,常见的抗性机制是降解抗生素。如能产生β-内酰胺酶的细菌能降解β-内酰胺类抗生素。 (5)发酵时如污染嗜菌体,可使产生菌发生溶菌现象。 染菌的危害因不同发酵而不同 2)防止空气引起的染菌 流程或设备设计的合理性; 过虑介质选用、装填; 过虑介质的灭菌和管理; 从日本工业技术院和上海第四制药厂分析空气带菌而造成的染菌分别为19.96%和 26%。空气除菌系统复杂,环节多,偶遇不慎便会导致空气除菌失败。 空气过滤除菌设备流程 空压机 储罐 二级冷却 加热器 空气过滤 粗过滤 空气冷却器的列管穿孔泄露,冷却水会渗入到空气中,造成染菌。 棉花-活性炭过滤器长期
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