BCA蛋白定量说明书.docVIP

Code No. T9300A TaKaRa BCA Protein Assay Kit v201309Da 目 录 内 容 页 码 ● 制品说明 1 ● 制品内容 1 ● 保 存 1 ● 试剂盒以外必备的主要试剂及仪器 1 ● 使用注意 1 ● 操作方法 1 ● 附 录 6 ● 关联产品 7 ● 制品说明 本制品是一种对蛋白质溶液进行高灵敏度比色定量的试剂盒,可用于含有表面活性剂蛋白质溶液的定量。 BCA 蛋白质定量包括两步反应,首先,二价铜离子(Cu 2+在碱性条件下被蛋白质的肽键还原成一价铜 离子 (Cu + , 还原后的铜离子浓度与溶液中所含蛋白质浓度成正比。 其次, 两个分子的 bicinchoninic acid (BCA 络合一个一价铜离子(Cu + ,形成一种在 562 nm处有强吸收值的紫色复合物。本制品依此为原 理,根据测定 562 nm 处光吸收值,与标准曲线对比,获得待测蛋白的浓度定量。使用 BCA 法进行蛋白 质定量具有以下特点:1. 不受蛋白质种类的影响,在 0.02~2 mg/ml浓度范围内蛋白质浓度与吸光度值 成线性关系; 2. 对表面活性剂的干扰影响小。但由于还原剂和螯合剂对反应有阻害性,因此本制品不适 用于含有还原剂或者螯合剂的蛋白质样品的定量。详细信息见“附录”的表 1。 使用本制品进行样品定量时,可使用试剂盒中附带的 BSA Standard Solution制备标准曲线。使用本制品 时, 1 ml标准反应体系可进行 500次反应,使用微孔板的 200 μl 微量反应体系可进行 2,500次反应。 ● 制品内容 1. BCA Reagent A 250 ml ×2支 2. BCA Reagent B 20 ml ×1支 3. BSA Standard Solution(2 mg/ml * 1 ml ×10支 *:BSA Standard Solution(牛血清白蛋白标准品溶液保存在 0.9% NaCl和 0.05% NaN3溶液中。 ● 保 存 BCA Reagent A、 BCA Reagent B : 室温保存 BSA Standard Solution : 4℃ *本制品为常温运输。收货后, BSA Standard Solution请于 4℃保存。 ● 试剂盒外必备的主要试剂及仪器 1.分光光度计及适配的 1 ml比色皿(1 ml反应体系时使用 2.酶标仪及适配的 0.2 ml微型比色皿及微孔板(200 μl 反应体系时使用 3. Microtube (2 ml或 1.5 ml 4.水浴槽(37℃ 5.恒温箱(60℃ (低浓度蛋白质样品测定时使用 ● 使用注意 以下为使用本试剂盒时的注意事项,使用前请一定认真阅读。 1. BSA Standard Solution使用前室温放置,恢复至室温或在 20~50℃的水浴中复温。轻弹混匀,轻微 离心后使用。 2. 稀释检测样品和标准品时,可使用去离子水、 0.9% NaCl或 PBS 。 3. BCA Reagent A和 BCA Reagent B在低温下可能会产生沉淀物。使用前于 20~37℃保温,轻轻振荡 混合,使沉淀物完全溶解后再使用。 4. 如果没有配备 562 nm滤光片,可选择 540~570 nm的滤光片进行测定,不会对蛋白定量产生影响。 5. 高浓度样品测定之后, 用水充分冲洗比色皿后再使用。 色素残留在比色皿上会影响低浓度样品的测定。 ● 操作方法 本制品共提供了五种操作流程,请根据样品情况选择相应操作流程。 a. 标准操作流程(定量范围:50~2,000 μg/ml 【 1 ml反应体系】 b. 标准操作流程(定量范围:50~2,000 μg/ml 【 0.2 ml反应体系】 -1- c. 低浓度蛋白质样品的操作流程(定量范围:0~50 μg/ml 【 1 ml反应体系】 d. 低浓度蛋白质样品的操作流程(定量范围:0~50 μg/ml 【 0.2 ml反应体系 使用 Microtube 】 e. 低浓度蛋白质样品的操作流程(定量范围:0~200 μg/ml 【 0.2 ml反应体系 使用微孔板】 【工作液的配制】 测定前,按照 BCA Reagent A : BCA Reagent B = 100 : 1的比例混合后配制成工作液。例如配制 30 ml的工作液时,在 30 ml的 BCA Reagent A中添加 0.3 ml的 BCA Reagent B后,充分振荡混匀。 配制后的工作液可在 4℃保存三天使用。 所需工作液量的计算方法如下: 所需工作液总体积(ml = [(BSA 标准溶液 8 份或 7 份 + 检测样品数×平行样本数(n + 1 ] ×1 个样品所需的工作液体积 例 标准操作流程【 1 ml 反