《化学发光免疫技术》.pptVIP

;第二十一章化学发光免疫技术 ;;目　录 ;化学发光免疫技术是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的抗原抗体反应技术相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、维生素和药物等的检测分析技术。该技术具有特异性高、灵敏度高、分离简便、 快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化分析等特点，在免疫学检验中应用广泛。 ;放射免疫技术;第一节 基本知识 ;1.光照发光（photoluminescence）;2.生物发光（bioluminescence）;3.化学发光;一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下条件：;???化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发光底物。;作为化学发光免疫技术的化学发光剂应符合以下几个条件： ;常用的化学发光剂或发光底物有 1.直接化学发光剂 2.酶促反应的发光底物 3.电化学发光剂 ;1.直接化学发光剂;吖啶酯在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长 为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发 态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。 ;2.酶促反应的发光底物 ;（1）鲁米诺或其衍生物 ;鲁米诺增强发光反应原理;（2）AMPPD ;3．电化学发光剂 ;用化学发光剂（如吖啶酯）直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)和磁颗粒性的抗体（抗原）发生免疫反应后，通过磁场把结合状态和游离状态的化学发光剂标记物分离开来，这时只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光。由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，可从标准曲线上计算出待测抗原(抗体)的含量 ;化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图 ;1.分离方法 常用磁颗粒分离技术，即用抗原或抗体包被磁颗粒，与标本中相应抗体或抗原及吖啶酯标记的抗体或 抗原通过一定模式的免疫学反应后,最终通过在磁场 中冲洗将结合到免疫复合物中的标记物和游离标记物 进行分离的技术。;2.常用的免疫学反应模式 ;三、技术要点;化学发光酶免疫分析（CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗体(抗原)发生免疫反应后，经洗涤将结合物与游离的酶标物分离后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。;碱性磷酸酶化学发光酶免疫分析双抗体夹心法原理示意图 ; 1.根据标记酶不同分类 可分为辣根过氧化物酶标记的化学发光酶免疫分析和碱性磷酸酶标记的化学发光酶免疫分析。前者常以鲁米诺或其衍生物作为发光底物，后者常以AMPPD作为发光底物。 2. 根据免疫学反应模式分类 同化学发光免疫分析，主要有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原竞争法等主要模式，所不同只是相应抗原或抗体上标记的是酶而不是直接标记发光剂。;三、技术要点;电化学发光免疫分析（ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，通过抗原抗体反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的抗原或抗体进行定量分析，它包括电化学和化学发光两个过程。 ;电化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图 ;电化学发光免疫测定示意图;1.分离方法 常用磁颗粒分离技术 2.免疫学反应模式 其反应模式同发光免疫分析，主要有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原竞争法三种主要模式，所不同只是相应抗原或抗体上标记的是三联吡啶钌。;三、技术要点;第五节 化学发光免疫技术的临床应用;;4.贫血因子 维生素B12、叶酸、红细胞叶酸、铁蛋 白等。 5.肿瘤标记物 AFP、CEA、PSA、游离PSA、CAl9-9、CAl25、CAl5-3等。 6．感染性疾病 衣原体抗原、尿衣原体抗原、衣原 体抗原确认、弓形体IgG抗体、弓形体IgM抗体、风 疹病毒IgG抗体、风疹病毒IgM抗体、巨细胞病毒IgG 抗体、巨细胞病毒IgM抗体等。;7．糖尿病 胰岛素、C肽等。 8．心血管系统 肌酸激酶MB同工酶、地高辛、肌红 蛋白、心肌肌钙蛋白-I等。 9．病毒标记物 HIVl/2Ab、HBsAg、HBsAg确认、 HBsAb、HCVAb、HAV IgM、HAVAb、HBcAb、HBclgM、HBeAg、HBeAb等。;10．骨代谢 骨胶原酶、脱氧吡啶啉等。 11．过敏性疾病 总IgE、特异性IgE等。 12．治疗药物监测 茶碱、地高辛、环孢素、巴比 妥等。;化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的 化学能使分子激发而发光。化学发光免疫分 析是将化学发光与免疫反应相结合，用于检 测微量抗原或抗体的标记