《分子生物学简答题》.docVIP

如何理解结构决定功能？ 胸腺嘧啶（T，thymine），5-甲基尿嘧啶； 尿嘌呤（U，Urncil），2,4二氧嘧啶； 尿嘌呤（U，Urncil），2,4二氧嘧啶； 胞嘧啶（C，cytosine），2-氧-4氨基嘧啶； T和U就因为5位上一个甲基的区别，虽都是与A发生互补配对，但是一个是RNA的碱基，一个是DNA的碱基。T在形式上也许就是U的甲基化，经过进化选择，就留下来了，因为甲基化后确实会稳定一些，甲基化也成了一种碱基保护的方式。由于DNA负责遗传信息的传递，所以甲基化的形式就被留下了，而RNA的阶段很短，可能就不那么必要了，还可以省点C源。 C和U因为4位上一个是氨基一个是羰基然后一个就和G配对，一个和A配对。 1、Each allele has a different phenotype ,why(illustrate by example). = 1 \* GB3 ①位于染色体同一位置的分别控制两种不同性状的基因是等位基因，等位基因之间具有多种关系。同一条基因的变异体称为复等位基因，复等位基因的存在使突变体之间能够形成杂合子，这些复等位基因之间的关系有各种形式。除了最简单的情况外，通常一系列等位基因往往具有不同的表型。例如，黑腹果蝇的w基因座上有一系列的等位基因所表现的从红眼一直到白眼的多种眼色，其颜色从深到浅均有。在黑腹果蝇控制眼色的w基因座的杂合子中，红色（野生型）相对于其他基因来说是显性的，它们有很多不同的突变等位基因，尽管一些突变基因并未产生眼睛颜色，但是一些基因产生了颜色。这种杂合子的表型依赖于每一个突变所遗留下的活性：每一种突变等位基因代表了该基因的不同突变，这些突变不会完全破坏基因的功能，而会保留一定的活性，由此会产生特征性的表型。 = 2 \* GB3 ②当等位基因存在时，可能是携带两种突变基因的杂合子，一个突变可能都是显性的，也可能部分是显性的，在任何一个遗传位点上并非一定要有一个野生型基因。例如人类血型系统：缺失功能用空白型即O型；功能性的A型和B型是共显性的，并对O型表现出显性。 2、Conservation of exons and its application. ①外显子就是在DNA序列中被转录成mRNA片段的一段序列； = 2 \* GB3 ②外显子序列通常处于编码氨基酸序列的选择压力下，因而它们很少发生变化，且很多改变不影响密码子意义，同时其不利突变可因不利选择而被有效地去除，因而它在进化中具有保守性。 ③许多生物中含有这样功能保守的基因区域，其基因序列所代表的蛋白质应当有两个特性：有一个开放的阅读框；在其它生物中很可能存在与它相关的序列。 = 4 \* GB3 ④根据外显子的保守性的特征可以用来分离和鉴定基因，确认那些在许多生物体中都存在的序列片段。物种杂交可作为鉴定基因的第一条标准，将杂交基因的候补片段进行测序，如果它们有阅读框，则它们就可被用来分离周围的基因组区域；如果它们是一个外显子的一部分，则可以用它来鉴定整条基因并最终分离出蛋白质。 3、Chromosome walking and its application. 从第一个重组克隆插入片段的一端分离出一个片段作为探针从文库中筛选出第二个重组克隆，该克隆插入片段含有与探针重叠的顺序和染色体的其它顺序。从第二个重组克隆的插入片段再分离出末端小片段筛选第三个重组克隆，如此重复，得到一个相邻片段，等于在染色体上移了一步，称为染色体步移。 染色体步移技术是一种重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效地获取与已知序列相邻的未知序列，即侧翼序列。主要应用有： （1）根据已知基因或分子标记连续步移，获取人、动物和植物的重要调控基因，可用于研究结构基因的表达调控； （2）步查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列； （3）鉴定T-DNA或转座子的插入位点； （4）用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列； （5）用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。 4、How to clone gene for genome? 基因组DNA克隆的出发材料是基因组DNA。高等真核生物染色体基因组DNA的基因文库，通常是用λ噬菌体或柯斯质粒作载体构建的。 （1）应用λ噬菌体载体构建基因组文库：第一步是从给体生物制备基因组DNA，并用限制酶消化法产生出适于克隆的DNA片段。然后在体外将这些DNA片段同适当的λ噬菌体连接成重组体分子，并转化到大肠杆菌的受体细胞中去。最后从转化子克隆群体中挑选出含有目的基因的克隆。 （2）应用柯斯质粒载体构建基因组文库：用核酸内切限制酶局部消化基因组DNA使真核基因组DNA克隆的柯斯质粒载体上，然后分离收集分子量为35-45kb的片段群体，并同线性化处理的柯斯质粒载体DNA连接重组