免疫细胞标志和功能检测工作技术应用.pptVIP

齐齐哈尔医学院免疫 6.淋巴细胞功能体内试验的方法主要是( )A.转化试验 B.迟发型超敏反应C.对异物排斥反应的能力D.淋巴细胞计数 E.血清中Ig浓度的检测 7．正常情况下，健康人外周血经PHA刺激后，淋巴细胞转化率为( )A.40% B.40%～50% C.60%～80%D.80%± E.90 8．采用放射性核素法检测T淋巴细胞转化功能时，3H-TdR加入至培养基的时间是( )A.G0期 B.G1期 C.S期 D.G2期 E.M期 9．测定NK细胞常根据其杀伤肿瘤细胞的功能来判断，人靶细胞常选用( )A.K562 B.YAC C.HeLa D.Mccoy E.Vero B C C A 齐齐哈尔医学院免疫 10.荧光标记法计数外周血B淋巴细胞，检测的特有的表面标志是( ) A.CD19 B.CD20 C.补体受体 D.mIg E.FcR 11.常用检测细胞毒效应的方法是( ) A.3H-TdR掺入法 B.125I释放法 C.51Cr释放法 D.形态学检测法 E.CD8检测法 12.检测NK细胞不能采用的实验（ ） A.ELISPOT B.酶释法 C.放射性核素法 D.荧光分析法 E.电泳分析 13.能刺激淋巴细胞增殖的物质不包括（ ） A.肿瘤抗原 B.噬菌体 C.PHA D.ConA E.PWM D C E B * * * * 齐齐哈尔医学院免疫 齐齐哈尔医学院免疫 淋巴细胞标志及功能检测 龚道科 2002.4 齐齐哈尔医学院免疫 正常转化率:60%-80%; 小于50%为降低 齐齐哈尔医学院免疫 优点：形态学方法简便易行，适 于基层实验室应用。 缺点：判断结果易受主观因素影 响，重复性和准确性差。 方法学评价： 齐齐哈尔医学院免疫 外周血单个核细胞 37℃ 56h + 收集培养细胞 液体闪烁器计数cpm 加入3H-TdR PHA 无PHA 37℃ 16h （2）3H-TdR掺入法 齐齐哈尔医学院免疫 优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观 强，重复性好。 缺点：但需一定设备条件，同时还存 在放射性核素污染问题。 SI= 刺激指数 PHA刺激管cpm均值 对照管cpm均值 齐齐哈尔医学院免疫 (3)MTT 比色法 MTT（噻唑盐）在活细胞内被线粒体琥珀酸脱氢酶还原成蓝黑色(甲臢）物质，与细胞增殖呈正相关。 齐齐哈尔医学院免疫 方法学评价： 优点：操作简便，无放射性污染 缺点：敏感性不及放射性核素法 齐齐哈尔医学院免疫 感染性疾病，T细胞会形成对病原微生物的免疫记忆，在体外分离到T细胞后，培养增殖T细胞的同时加入相应病原的特异抗原进行刺激，激活该细胞的记忆，有记忆的细胞会分泌γ-干扰素，通过检测γ-干扰素的量可以反映T细胞情况。 （二）抗原特异性T细胞增值试验 了解 齐齐哈尔医学院免疫 通过TCR与MHC-肽的特异性相互作用，来检测抗原特异的T细胞，了解机体的免疫状况。 （三）MHC-肽四聚体技术 了解 齐齐哈尔医学院免疫 免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平。 （四）T细胞分泌功能测定 了解 齐齐哈尔医学院免疫 1.原理 靶细胞抗原 T细胞 观察杀伤活力 致敏CTL 靶细胞 （五）T细胞介导的细胞毒试验 熟悉 齐齐哈尔医学院免疫 形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞 同位素法：淋巴细胞（CTL）+含51Cr 的肿瘤细胞 肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 γ计数仪测定51Cr放射活性 意义： 判断肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力 2.方法 齐齐哈尔医学院免疫 (一)特异性抗原皮肤试验(OT) (二)PHA皮肤试验 (六) 体内试验 了解 齐齐哈尔医学院免疫 溶血空斑试验 酶联免疫斑点试验 二、B细胞功能检测 了解 齐齐哈尔医学院免疫 SRBC 取出脾细胞， 加入SRBC及补体 4天 37℃ 0.7%琼脂溶液 37℃ 溶血 溶血空斑试验 1.原理 齐齐哈尔医学院免疫 一个溶血空斑表示一个抗体形成细胞。 溶血空斑的大小表示抗体形成的量。 齐齐哈尔医学院免疫 测定药物或手术对体液免疫功能的影响 评价免疫治疗或免疫重建后机体体液免疫状态 临床应用与评价 齐齐哈尔医学院免疫 染色计数 离心取上清 测LDH 形态学法 酶释放法 放射性核 素释放法 溶解靶胞细 常用靶细胞:人K56