色谱定性定量分析方法.ppt

PPT课件 LOGO China Pharmaceutical University 色谱定性定量分析方法 * PPT课件 色谱分析方法验证 色谱定量分析方法 联用技术定性方法 色谱定性分析方法 * PPT课件 一、色谱定性分析方法  保留时间 tr 相对保留时间 RRT，t/tr 相对保留值 α, (t-t0)/(tr -t0） 保留指数 I * PPT课件 色 谱 高分离能力，但鉴别结构的能力较弱。 光 谱 能提供丰富的结构信息，但是对分析物纯度较高。 二、色谱-光谱联用技术定性 广泛用于药物中的杂质、体内外代谢产物的结构鉴定 * PPT课件 气相色谱-质谱联用 多用于分离易挥发、热稳定、极性小的化合物 GC-MS：采用EI离子源。 EI：获得分子离子峰及丰富的分子结构信息； * PPT课件 分离对象较广 LC-MS： 采用API 离子源; 一级质谱获得分子量信息； 高裂解电压（CID）或二级质谱（MS/MS）获得分子结构信息。 液相色谱-质谱联用 * PPT课件 例：盐酸乙哌立松片主要降解产物的定性鉴别  * PPT课件 鉴定要点： 1、利用LC-UV选择最佳LC分离条件，并确定主峰与降解产物的峰位； 供试品溶液的LC-UV图 * PPT课件 2、选择合适的离子源，利用LC-MS获得杂质的准分子离子峰。 LC-ESI-MS的 总离子流色谱图 LC-APCI-MS的 总离子流色谱图 * PPT课件 3. 获得降解产物准分子离子峰的裂解信息。 方式一：在APCI条件下采用较高的CID电压或二级质谱裂解m/z 175.3，获得碎片信息； 方式二：在GC-MS(EI)质谱获得分子离子峰及其裂解途径； * PPT课件 4、利用原药的质谱裂解途径确定降解产物的可能结构； 杂质YJ的结构 * PPT课件 APCI EI * PPT课件 联用技术定性鉴定规律 1、分析物质结构，确定色谱分离模式； 2、以常用检测器（GC:FID/LC:UV）为手段，优化色谱分离条件，确定待鉴定组份峰位； * PPT课件 3、根据化合物结构，选用合适的光谱技术鉴定； 4、依据光谱信息进行结构鉴定： 根据质谱提供的分子量和分子碎片信息，结合原药的光谱信息初步推断未知物结构； * PPT课件 三、色谱定量分析方法 1、色谱信号的测量: 色谱峰峰高与峰面积反映检测器对样品的响应值，定量分析中峰面积更为常用； 2、定量分析的方法 面积归一化法；外标法；内标法；标准曲线法 * PPT课件 三、不同检测器的色谱信号与物质浓度关系 FID、ECD、UV检测器的响应（峰面积）与样品的浓度呈线性关系； ELSD响应的自然对数与样品的浓度或质量呈线性关系； 质谱（MS-ESI）检测器高浓度时的响应与样品的质量可能呈二次或更复杂的方式。 * PPT课件 四、色谱分析方法验证 目的： 证明所采用的色谱分析方法适合于相应的检验 要求，判断能否用于药品分析。 效能指标：评价分析方法的尺度 效能指标包括: 精密度、准确度、专属性、检测限、定量限、线性与范围、耐用性、稳定性、系统适用性等 * PPT课件 药品质量标准分析方法验证 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则 药物稳定性试验指导原则 缓释、控释制剂指导原则 不同分析测定方法的要求 * PPT课件 ① 专属性（specificity）: 意义：指有其他成分可能存在情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。 内容： 药物制剂含量测定时的专属性考察内容： A、杂质中间体与主成份的分离情况； B、破坏性试验产生的降解产物与主成份的分离情况：酸、碱、热、氧化、光破坏 C、辅料是否干扰测定。 * PPT课件 ②准确度（accuracy）： 意义：测量值与真实值接近的程度。 药物制剂的含量测定以回收率表示。 内容：即通过在空白基质中加入已知量不同浓度的对照品，比较测定值和加入值确定。 一般在期望浓度的80%、100%、120%三个水平量，各测定三次，回收率均值在98-102%。 * PPT课件 PPT课件 LOGO