《GBT16550-2019新城疫诊断技术》标准全文及编制说明.docVIP

GB/T××××____×××× PAGE 2 附件2 ICS 11.220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 16550—×××× 代替GB/T 16550—2008 新城疫诊断技术 Diagnostic techniques for newcastle disease （草案） FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 XXXX=XX-XX 实施 GB/T××××____×××× PAGE 2 PAGE 1 - GB/T ××××—200× PAGE I 引 言 新城疫（Newcastle disease, ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）强毒株感染禽类引起的一种急性、烈性传染病，给世界养禽业带来巨大的经济损失。世界动物卫生组织（OIE）将新城疫列为法定报告的动物疫病，我国农业农村部将其列为一类动物疫病。 新城疫可感染250多种鸟类，其中以家鸡和珠鸡最易感。感染禽（野鸟）及带毒禽（野鸟）系主要的传染源，新城疫病毒主要经消化道和呼吸道传播，被污染的水、饲料、蛋托（箱）、种蛋、鸡胚和带毒的野生飞禽、昆虫及有关人员等均可成为传播媒介。 新城疫病毒在分类地位上属于副黏病毒科、禽腮腺炎病毒属，目前新城疫病毒只有一种血清型，但可分为不同的基因型。OIE规定，新城疫是由新城疫病毒强毒引起的禽类感染，其毒株的毒力应符合以下标准之一：（1）毒株1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）大于或等于0.7；（2）毒株F2蛋白C端（第113-116位）至少包括3个碱性氨基酸残基，F1蛋白N端，即第117位氨基酸残基为苯丙氨酸（F）。因此，对于新城疫的诊断，除了鉴定新城疫病毒之外，还需要对其致病性进行评估。对于致病性评估的方法，可通过1日龄SPF鸡ICPI进行测定，也可通过分子生物学技术，如RT-PCR结合序列测定等。进行病毒分离和致病指数测定需要满足生物安全的需求，即：需要在生物安全三级实验室进行。 本标准的修订参考了OIE《陆生动物诊断试验和疫苗标准手册》（2012版），并结合我国相关技术研究新成果制定，在技术上与国际先进技术保持一致。 GB/T ××××—200× PAGE 12 新城疫诊断技术 1 范围 本标准规定了新城疫的临床诊断、病原分离与鉴定、血凝和血凝抑制试验、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、荧光定量RT-PCR和焦磷酸测序的技术要求。 本标准适用于新城疫的诊断。 2 缩略语 Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环次数（Threshold cycle） DEPC： 焦碳酸二乙酯 （Diethypyrocarbonate） HA ： 血凝（Hemagglutinin） HI：血凝抑制 (Haemagglutination inhibition) ICPI： 脑内接种致病指数 (Intracerebral pathogenicity index) NDV：新城疫病毒（Newcastle disease virus） SPF：无特定病原体 (Specific pathogen free) RT-PCR：反转录聚合酶链式反应 (Reverse transcription-polymerase chain reaction) 荧光RT-PCR：实时荧光反转录聚合酶链式反应（Real-time RT-PCR） 3 临床诊断 3.1 临床症状 发病急、死亡率高； 体温升高、极度精神沉郁、呼吸困难、食欲下降； 粪便稀薄，呈黄绿色或黄白色； 出现扭颈、翅膀麻痹等神经症状； 免疫禽群出现产蛋下降。 3.2 病理变化 全身黏膜和浆膜出血，以呼吸道和消化道最为严重； 腺胃黏膜水肿，乳头和乳头间有出血点； 盲肠扁桃体肿大、出血、坏死； 十二指肠和直肠黏膜出血，有的可见纤维素性坏死病变； 脑膜充血和出血；鼻道、喉、气管黏膜充血，偶有出血，肺可见淤血和水肿。 3.3 结果判定 当禽类出现上述临床症状和病理变化，可判定为临床疑似新城疫，确诊必须采集样品进行实验室检测。 4 样品采集与处理 4.1总则 样品采集宜在发病初期、选择具有典型临床症状的家禽进行，可采集脑、肺脏和脾脏等组织脏器，也可采集未见明显临床症状禽类的泄殖腔和口咽拭子样品进行实验室诊断。采样过程中不得交叉污染，在田间采样要注意勤换一次性手套，尽量做到无菌采集。采样和样品处理过程中要符合生物安全要求。 4.1组织样品采集 典型临床发病禽可无菌采集脑、肺、脾、气管、肝、心等组织脏器，装入无菌采样袋或其他灭菌容器，编号，冷冻保存。 4.2拭子样品采集 采集活禽样品时可采集口咽和泄殖腔拭子。取口咽拭子