常染色体上基因.pptxVIP

人类中发现的变异体： XX 男性，XY 女性 1987年,David page 提出了Testis-determining factor gene 在人类中简写为TDF, 在小鼠中简写为Tdy 继而 他克隆了Y染色体上的此断DNA序列，140kb Zinc-finger protein 90年,P.Goodfellow (Imperial Cancer Research Fund) 发现病例 XX男性不含ZFY 基因，克隆了另外一段基因 35kb ,称之为 Sex determining region Y,简写为SRY,小鼠中 简写为Sry (91.5.9 Nature) 以后从该区域分离出一段序列,编码223aa的多肽,为转录因子，有一个DNA结合域。;基因转移实验： 将Sry序列克隆到噬菌体L741中， f741为该片断 f741 注射到受精卵中 再转移到母体内发育;四 性别分化与环境条 (一) 环境条件： 蜜蜂中： 蜂王和工蜂都由受精卵发育而成，但食性的 差异导致性别不同。(2n=32) Missisibi alligator 受精卵在不同温度下的性别差异 植物中 ：黄瓜 氮肥 缩短日照 雌花增多 延长日照 雄花增多 (二 )激素的影响 1 free-martin 2 人类中激素的作用;3 性反转(Sex reverse) 五 性别控制 (一)通过环境条件来控制性别 (二)通过基因型控制性别 1 精子分离 2 控制受精的条件 3 牛胚胎性别鉴定的研究 胚胎性别鉴定方法： 非侵害性的： X相关酶活力测定 害性的： 核型分析等;Polemerase Chain Reaction (PCR) 技术的应用 Cetus公司 Kary Mullis 博士85正式提出，87年获专利 Do. Pont 公司提出异议 91年2月底法院判Cetus 公司胜 PCR反应的基本原理( see genetics );PCR反应用于胚胎鉴定：(Peura1991) (1) 牛卵体外受精和胚胎培养 未成熟的卵泡在TCM199培养基上培养，用解冻的精子受精，24小时后，将其转移到牛输卵管上皮条件 的培养基中5－7天，可得到囊胚期的胚胎。 孵育过夜用于转移 用蛋白酶K消化 99摄氏度变性 得到A、B样品，以同样方法不加囊胚作对照 (2) 寡聚核苷酸引物的选用 牛DNA特异性引物，5端引物相当于1.715卫星DNA的第208－227个nt, 3 端引物相当于404－423nt 牛Y染色体特异性引物 a:BRY4a重复序列 5端为1159－1178nt,3端1439－1459nt b:BRY1重复序列一段，5端引物1－21nt,3端引物281－301nt a+牛特异引物用于A样品分析 b+牛特异引物用于B样品分析 预计得到产物：两种301bp的Y特异性产物，一种216nt的非特异性产物 (3) 胚胎样品的PCR扩增 (4) PCR产物分析; Mark A B CK 301 216 ;4 Y染色体特异DNA序列的获得 female DNA male DNA sonication mboI cut 100 1 mixed dsDNAwas isolated on hydroxylapatite chromatograph. TypeI: both strands were derived from female DNA TypeII