基因工程常规技术-核酸提取纯化.pptVIP

RNA提取注意事项 制备RNA的关键—防止内外源RNase的作用 RNase的特点：抗酸抗碱,具很广pH作用范围; 抗高温严寒(0-65℃均具活性） 抗变性剂 * RNA提取注意事项 体内RNase 样品取材要新鲜，并且在液氮或-70℃冰箱中冻存。 RNA提取试剂的选择，TRIzol Reagent 或试剂盒。 匀浆器或是研钵；破碎细胞要快速；尽量在低温下进行。 体外RNase 空气中的RNase 试剂中带有的RNase 实验耗材 实验者本身 * 解决办法： 外源RNase—高温，焦碳酸二乙酯(DEPC)处理所有溶液，（Tris·HCl除外）和器皿，操作者带手套 内源RNase—高温抽提，强蛋白质变性剂，RNase抑制剂，蛋白酶K等 * DEPC有刺激性，对眼睛气道粘膜有强刺激，在操作中应尽量在通风的条件下进行，DEPC毒性并不是很强，但吸入的毒性是最强的，使用时戴口罩，不小心占到手上注意立即冲洗。 高温高压121℃， 15min， DEPC即降解成二氧化碳和水 * 总RNA的提取与纯化 一般流程： 1、样本前处理 2、细胞裂解释放RNA 3、RNA的纯化及获得 4、RNA质量检测 * 样品前处理 新鲜血液，不超过4小时 新鲜的幼嫩组织 生长