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电化学发光免疫测定示意图 电化学发光免疫测定工作示意图 标记磁颗粒在电场中发光工作示意图 ELECSYS 2010型全自动电化学发光免疫分析仪 Modular Analytics E 模块170型 可用于内分泌激素类、肿瘤标志物类、心肌标志物类、病毒标志物类、治疗性药物浓度、骨代谢指标和贫血类等方面的检测，是目前免疫化学应用最为广泛的新技术。 ?四、在临床免疫检测中的应用 第三节 自动化荧光免疫分析系统 荧光免疫自动化分析主要是将抗原—抗体结合反应与荧光物质发光分析和计算机技术有机结合的一项自动化免疫分析技术。根据抗原抗体反应后是否需要进行固相分离，分为均相和非均相两类。非均相荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定法；均相荧光免疫测定主要有荧光偏振免疫测定法。 时间分辨荧光免疫测定（time resolved fluorescence immunoassay, TRFIA）是以镧系元素标记抗原或抗体作为示踪物，并与时间分辨测定技术相结合，建立起来的一种新型非放射性微量分析技术，具有灵敏度高，镧系元素发光稳定，荧光寿命长，不受样品自然荧光干扰，标准曲线范围宽等特点，已在临床实验室广泛使用。 ?　一、时间分辨荧光免疫分析仪 Eu3+元素激发光谱和发射光谱之间的stokes位移 （一）、原理 时间分辨Eu3+元素荧光信号测量示意图 （二）仪器测定技术要点 　⒈ 抗原抗体结合 　⒉ 加入Eu3+螯合抗体 　⒊ 加入酸性增强液 　4. 信号检测 固相双抗体夹心TRFIA检测过程示意图 增强液(enhancement solution)，使Eu3+抗体－抗原复合物的PH值降低至2~3，以利于Eu3+从复合物上完全解离下来，游离的Eu3+为增强液中的另一种螯合剂所螯合，在协同剂等其它成分的作用下，与增强液中的β-二酮体生成一个Eu3+在其内部的保护性胶态分子团，这是一个新的具有高强度荧光的稳定螯合物，它在紫外光的激发下发射很强的荧光，信号的增强效果可达上万倍，该技术使用了解离增强步骤，并且采用了前后两种不同的螯合剂，前一种用于Eu3+与抗体标记，后一种用于与解离下来的Eu3+螯合成新的强荧光发射分子，因此，又将该技术称为解离增强镧系元素荧光免疫(dissociation-enhanced lanthanide fluoroimmunoassay, DELFIA) （三）解离增强原理： auto DELFIA全自动时间分辨荧光免疫检测系统 　 　1. TRFIA分析用的酸性增强液易受环境、试剂、容器等里面的镧系元素污染，使本底升高，所用试剂和器材应尽量防尘。 　2.TRFIA分析用载体最常用的是聚苯乙烯微96孔板，其荧光本底低，并有洗涤微孔板的自动装置，但不同厂家生产的微孔板，所产生的荧光有很大差异，应选择应用。 （四）注意事项 　荧光偏振免疫测定　(fluorescence polarization immunoassay，FPIA)，为一种均相荧光免疫测定方法，其利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光照射后，可吸收光能而产生另一单一平面的偏振发射荧光，该荧光强度与荧光 标记物质在溶液中旋转的速度与分子大小呈反比，常采用抗原-抗体竞争反应原理，适用于小分子半抗原（如药物浓度）的检测。 ?　 二、荧光偏振免疫分析仪 　光的本质是电滋波，光是各个方向电滋波的混合物，当光线通过偏振滤光片后，形成只有一个方向的电滋波，称之为偏振光。荧光物质经单一平面的偏振光（蓝色光，485nm）激发后，可吸收光能跃入激发态，在其恢复至基态时，释放能量并发射出单一平面的偏振荧光（绿色光，525nm～550nm） 。偏振荧光强度与荧光物质分子在液相中转动的速度呈反比，即分子大转动速度慢，荧光强度大，分子小转动速度快，荧光强度小。 (一) 原理 偏振光和偏振荧光发生示意图 荧光偏振免疫测定工作原理示意图 　1. 抗原抗体反应 　2.偏振荧光强度测定 （二） 仪器测定技术要点 　1.FPIA的结果好坏取决于荧光素标记的好坏、激发态荧光的平均寿命、抗原的相对分子量和复合物的特性等因素。 　2.为提高FPIA灵敏度，可用除蛋白剂对标本进行预处理，除去干扰成分。 （三）注意事项 第四节 自动化酶联免疫分析系统 根据全自动酶联免疫分析系统的处理模式，人们通常将全自动酶免分析仪分成二类，一类为分体机，一类为连体机。分体机是由“前处理系统”即全自动样本处理工作站和“后处理系统”即全自动酶免分析仪两个独立的部分组成。连体机是由多个模块组成，使用一台计算机、一套操作系统实现了从标本稀释、加样到酶标板孵育、洗涤、加试剂、再孵育、洗涤、读数和结果打印全自动进行。 （一