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第九章、植物线虫的基本研究方法 第九章、植物线虫的基本研究方法 • 植物线虫的采集和保存： • 植物线虫的采集和保存： 应根据取样目的和具体的病害特点来制定取样计划和确定 应根据取样目的和具体的病害特点来制定取样计划和确定 取样方法。 取样方法。 1.病变组织的采集 1.病变组织的采集 病变部位，一般也是线虫的存在部位。如：根结，小麦粒 病变部位，一般也是线虫的存在部位。如：根结，小麦粒 线虫危害引起的虫瘿等。 线虫危害引起的虫瘿等。 2.病根、根际土壤和大田土样的采集 2.病根、根际土壤和大田土样的采集 在离地表5－20cm的根际取样，遵循少量多点的原则，每 在离地表5－20cm的根际取样，遵循少量多点的原则，每 块田取0.5－1kg土样，连同部分根系一起采集，采样时一般 块田取0.5－1kg土样，连同部分根系一起采集，采样时一般 采集长势较差的植物。 采集长势较差的植物。 3.样本的保存 3.样本的保存 采样时作好记录，时间、地点、作物，大型作物挂牌。样 采样时作好记录，时间、地点、作物，大型作物挂牌。样 本保存在5－10℃冰箱，袋口扎住，稍透点气。若无冰箱，则 本保存在5－10℃冰箱，袋口扎住，稍透点气。若无冰箱，则 放在阴凉处，打开袋口，最好马上分离。 放在阴凉处，打开袋口，最好马上分离。 植物线虫的分离 植物线虫的分离 1.从植物病组织中分离线虫的方法 1.从植物病组织中分离线虫的方法 （1）直接解剖分离 （1）直接解剖分离 分离根结等内寄生线虫的成熟雌虫，简单且快速，但只适 分离根结等内寄生线虫的成熟雌虫，简单且快速，但只适 合分离病组织中虫体较大的线虫。 合分离病组织中虫体较大的线虫。 （2）漏斗分离 （2）漏斗分离 适用于分离植物材料和土壤中较活跃的线虫，方法简便，容易 适用于分离植物材料和土壤中较活跃的线虫，方法简便，容易 操作，缺乏氧气，但不利于活动线虫的存活，分离效率低。 操作，缺乏氧气，但不利于活动线虫的存活，分离效率低。 （3 ）浅盘分离 （3 ）浅盘分离 原理与漏斗法相同，但通气状况更 原理与漏斗法相同，但通气状况更 好，线虫容易活动，存活率高，分离效 好，线虫容易活动，存活率高，分离效 率比漏斗法高，然而分离时间较长，所 率比漏斗法高，然而分离时间较长，所 获线虫悬浮液较脏。 获线虫悬浮液较脏。 2.从土壤中分离线虫 2.从土壤中分离线虫 （1）直接过筛分离 （1）直接过筛分离 • 60－100 目筛，可收集到胞囊 • 60－100 目筛，可收集到胞囊 • 325－400 目筛，可收集到大多数 • 325－400 目筛，可收集到大多数 线虫 线虫 • 500 目，可收集到根结线虫的卵 • 500 目，可收集到根结线虫的卵 • 用洗瓶冲（两面都冲），筛稍倾 • 用洗瓶冲（两面都冲），筛稍倾 斜， 斜， 使冲致一角落，用瓶或皿收集。 使冲致一角落，用瓶或皿收集。 可在短时间内处理大量样品， 可在短时间内处理大量样品， 但方法粗糙，所获线虫悬浮 但方法粗糙，所获线虫悬浮 液较脏。 液较脏。 （2）离心飘浮分离 （2）离心飘浮分离 • 线虫可飘浮在比重为1.12－1.20的蔗糖液中 • 线虫可飘浮在比重为1.12－1.20的蔗糖液中 （线虫比重约1.05） （线虫比重约1.05） • 简要步骤如下： • 简要步骤如下： （a ）40g土样中加约150ml水，混成悬浮液， （a ）40g土样中加约150ml水，混成悬浮液， 2000转/min离心5分钟； 2000转/min离心5分钟； （b）弃上清液（此时线虫沉于泥土中）； （b）弃上清液（此时线虫沉于泥土中）； （c ）加入蔗糖液，马上搅匀，立即离心 （c ）加入蔗糖液，马上搅匀，立即离心